Question

【题目】乙型肝炎病毒（HBV）可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒调节蛋白HBx对HBV复制有重要作用。图1表示在PCR过程中HBx基因与引物的关系，图2表示利用中国仓鼠生产乙肝病毒HBx蛋白流程图。回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增图1中HBx基因时，在第______次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键______（填“相同”或“不相同”）。

（2）基因表达载体导入受精卵常用______法，检测HBx基因是否转录出mRNA时，需要用______做探针，再与相应的物质杂交。

（3）④过程体外受精前需要对精子进行______处理，卵母细胞需要发育到______期，才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过______处理的受体仓鼠子宫内。

（4）在⑤步聚操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是______。

Answer 1

【答案】3 相同 显微注射 放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段 获能 MⅡ中 同期发情 外源基因的插入导致胚胎正常发育所需的基因不能表达

【解析】

基因工程的操作步骤：目的基因的获取、构建基因表达载体、把目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。

图2中：①获取目的基因、②构建基因表达载体、④体外受精、⑤胚胎移植。

（1）利用PCR技术扩增的过程为，由此可知，图1中HBx基因时，在第3次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键相同，都是磷酸二酯键。

（2）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；检测HBx基因是否转录出mRNA时，应该采用分子杂交技术，需要用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段做探针，再与RNA进行杂交，看是否出现杂交带。

（3）④为体外受精，该过程前需要对精子进行获能处理，卵母细胞需要发育到MⅡ中期，才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过同期发情处理的受体仓鼠子宫内，以保证胚胎移植入相同的生理环境。

（4）胚胎移植前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡，可能原因是：外源基因的插入导致胚胎发育所需的正常基因不能表达。