题目内容
【题目】人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL－2）。该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易 被降解。研究人员将1L－2基因与人血清白蛋白（HAS）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有1L－2生理功能、且不易降解的1L－2－HSA融合蛋白，其技术流程如图。请回答：
（1）图中③过程的模板是_______。表达载体1中的位点________应为限制酶Bg1Ⅱ的识别位点，才能成功构建表达载体2。
（2）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与1L－2蛋白对应的碱基序列不能含有____________，才能成功表达出IL－2－HSA融合蛋白。 启动子是__________识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。
（3）培养人外周血单核细胞时，需要将温度控制在___________℃，此外还需要通入__________（气体）。
（4）应用_____________技术可检测酵母菌是否表达出IL－2－HSA融合蛋白。
（5）如果基因表达载体2导入的是优质奶牛的受精卵细胞，经胚胎培养后移入受体母牛子宫内可以存活的生理学基础是 ________________。
【答案】 IL-2的cDNA a 终止密码子 RNA聚合酶 37 无菌的95%空气和5%CO2 抗原抗体杂交 母牛子宫对外来胚胎基本上不发生免
【解析】据图分析，①表示转录提取信使RNA，②表示逆转录形成目的基因，③表示PCR扩增技术。（1）PCR技术扩增的原理是DNA复制原理，所以该过程的模板与其产物相同，即IL-2的cDNA。根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，表达载体1上已有EcoRⅠ，推测位点a应含有BglⅡ。（2）融合基因转录出的mRNA中与1L－2蛋白对应的碱基序列不能含有终止密码子，才能成功表达出IL－2－HSA融合蛋白，否则HAS不能合成。启动子是RNA聚合酶的识别并结合的部位。（3）动物细胞培养所需要的条件是：95%空气和5%CO2气体环境、适宜温度（37℃）和PH、无毒无菌的环境及合适的营养成分，其培养基中通常需加入血清、血浆等一些天然成分。（4）检测蛋白质常常用抗原—抗体杂交技术。（5）胚胎培养后移入受体母牛子宫内可以存活的生理学基础是发情期母牛子宫对外来胚胎基本上不发生避免排异反应反应。
