题目内容
【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的________。小鼠体细胞体外培养时,所需气体主要是O2和CO2,其中CO2的作用是维持培养液(基)的______________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到________期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。体外培养条件下,ES细胞在______________细胞上,能够维持只增殖不分化的状态。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的__________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________,用__________的抗体进行杂交实验。
【答案】细胞核 PH值(或酸碱度) 囊胚 饲养层 核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ 蛋白质 抗Rag2蛋白
【解析】
分析题图:图示是利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解,其中①表示核移植过程,②表示早期胚胎培养过程,③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。
(1)核移植是指将体细胞核移植到去核卵母细胞中,因此①核移植过程中,在核移植前应去除卵母细胞的细胞核;CO2的作用是维持培养液(基)的PH值。
(2)ES细胞可从囊胚期的内细胞团中分离;体外培养时ES细胞在饲养层细胞上培养,可以维持只增殖不分化的状态。
(3)设计引物要遵循碱基互补配对原则,所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计;Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的,所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点。
(4)基因表达的产物是蛋白质,故为检测Rag2基因的表达情况,需要提取小鼠骨髓细胞的蛋白质与抗Rag2蛋白的抗体进行杂交。