题目内容
【题目】用基因工程技术生产羧酸酯酶CarE)制剂的流程如下图所示。回答下列问题：
(1)①过程所需的酶是___________。在构建基因表达载体过程中，构建的重组质粒上启动子的本质和作用是___________。
(2)实现②过程常用PCR技术，该技术的前提是要有___________，以便合成引物。为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5′端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是___________。
(3)过程③将重组表达载体导入大肠杆菌时，首先用Ca2+处理大肠杆菌，目的是___________。然后将___________溶于级缓冲液与该大肠杆菌混合，在一定温度下完成转化。
【答案】逆转录酶 启动子的本质是一段有特殊结构的DNA片段；作用是供RNA聚合酶的识别、结合以驱动目的基因的转录 一段已知目的基因的核苷酸序列 使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连 使大肠杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 重组质粒（基因表达载体）
【解析】
分析图解：图中过程①表示利用mRNA通过反转录法合成相应的DNA；过程②表示利用PCR技术对目的基因进行扩增；过程③表示将目的基因导入受体细胞（大肠杆菌）；过程④表示通过筛选获得工程菌。
（1）图中过程①表示利用mRNA通过反转录法合成相应的DNA的过程，需要逆转录酶的催化；基因表达载体的组成成分包括目的基因、标记基因、启动子、终止子等，其中启动子的本质是一段有特殊结构的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的识别、结合以驱动目的基因的转录。
（2）利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物；根据题意分析，在构建基因表达载体时，需要在引物的5′端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连。
（3）在将目的基因导入大肠杆菌时，需要先用钙离子处理大肠杆菌，使得大肠杆菌处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组质粒溶于缓冲液中与该大肠杆菌混合，在一定温度下完成转化。
开心蛙状元测试卷系列答案
