题目内容
【题目】基因工程中pIJ702是一种常用质粒(如图),其中tsr为硫链丝菌素(一种抗生素)抗性基因,mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落;而限制酶CLaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列。
(1)以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.4kb(1kb=1000对碱基)的SacⅠ/SphⅠ片段,构成重组质粒pZHZ8.上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表1中.由此判断目的基因的片段长度为_____kb,以上的操作还需要的一种工具酶是_____。
(2)已知pIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb,参照表1数据,以下关于重组质粒pZHZ8上酶切位点和酶切的叙述,正确的是_____
A.用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切可得到1.3kb的片段
B.用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切可得到四种不同长度的片段
C.用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切可得到最小的片段长度为0.3kb
D.重组质粒上的目的基因中不再含有Bg/Ⅱ酶切点
(3)此基因工程中所提及的黑色素是一种_____.
A.蛋白质 B.DNA C.RNA D.小分子有机物
(4)目的基因模板链中的TGA序列对应一个密码子,翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是_____.
(5)重组质粒pZHZ8上的标记基因是_____,在含硫链丝菌素固体培养基上培养后,筛选过程中要淘汰_____色的菌落。
【答案】1.4 DNA连接酶 C A UGA tsr基因(硫链丝菌素抗性基因) 黑
【解析】
分析题图:图示为pIJ702质粒的结构示意图,质粒是双链环状DNA分子。
分析表1:表1表示两种质粒的限制酶酶切片段长度。
(1)用BglⅡ等酶切割后,pIJ702长度为5.7kb,而pZHZ8长度都为6.7kb,增加了1kb;目的基因置换pIJ702上0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段,所以目的基因的片段有1.4kb。形成重组质粒需要DNA连接酶将目的基因和质粒连接起来。
(2)据表格中数据可以判断重组质粒pZHZ8中含有两个ClaI和PstI的酶切位点,因为PIJ702上含mel基因的ClaI/PstI区域长度为2.5kb,而只用ClaI切割后片段为2.2kb和4.5kb,只用PstI切割后片段长度为1.6kb和5.1kb,因此两种限制酶都用时,得到的最短片段为(2.5﹣2.2)=0.3kb。
(3)此基因工程中所提及的黑色素是基因控制合成的一种蛋白质。
(4)目的基因模板链中的TGA序列对应一个密码子,根据碱基互补配对原则可知,其对应的密码子是ACU,则翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是UGA。
(5)重组质粒pZHZ8上的标记基因是tsr基因;mel是黑色素合成基因,其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落,若mel基因部分被替换,则链霉菌菌落不能变黑,而成为白色,因此在含硫链丝菌素固体培养基上培养后,筛选过程中要淘汰黑色的菌落。