Question

【题目】甲型流感病毒为RNA病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发 明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下：

（1）改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板，利用__________酶，逆转录成对应DNA后，利用 ______技术扩增，并将其中某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码_____的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的多肽（蛋白质），因此 不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒，并保存。

（2）构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物 的反密码子能与（1）中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸（Uaa）。 将该基因与____连接后倒入宿主细胞。提取宿主细胞的_____进行分子杂交 鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。

（3）利用转基因宿主细胞制备疫苗。.将（1）中的重组质粒导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加________的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特定tRNA，翻译岀改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。特殊tRNA基因转录 时，识别其启动子的酶是________。

A.病毒的DNA聚合酶 B.宿主的DNA聚合酶

C.病毒的RNA聚合酶 D.宿主的RNA聚合酶

（4）上述病毒活疫苗与传统疫苗相比，具有的优点是：________。

Answer 1

【答案】逆转录酶（反转录酶） PCR 终止密码子 载体 总RNA 非天然氨基酸(Uaa) D 上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖，没有致病性，因此不经灭活或减毒即可制成疫苗

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录需要逆转录酶参与；基因工程中，可以使用PCR技术扩增目的基因；将某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列，导致翻译提前终止，改造后的基因表达时不能合成完整长度的多肽。

（2）将目的基因导入受体细胞前，先将目的基因和载体结合构建基因表达载体，确保目的基因可以在受体细胞内稳定存在并表达；提取宿主细胞的总RNA进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。

（3）利用转基因宿主细胞制备疫苗；将（1）中的重组质粒导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加非天然氨基酸的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA，基因转录需要专一性的酶的催化，启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点，RNA聚合酶具有物种专一性，识别其启动子的酶是宿主的RNA聚合酶，故选D。

（4）上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖，没有致病性，因此不经灭活或减毒即可制成疫苗。