题目内容
【题目】在一些情况下，细胞可通过自噬作用降解自身的非必需成分来提供营养和能量。为探究B蛋白对细胞自噬的作用，研究人员进行了系列实验。
（1）B蛋白在细胞质中的核糖体上合成，在细胞溶胶中折叠形成正确的_____________。B蛋白可以与磷脂结合，识别细胞内受损的细胞器或错误折叠的蛋白质分子，进而形成自噬体。自噬体与_____________融合降解受损的细胞器或错误折叠的蛋白质分子，自噬体与溶酶体的融合依赖于膜的_____________。细胞自噬的意义是清除细胞内衰老损伤的细胞器或错误折叠的蛋白质分子，维持_____________。
（2）研究人员进行了相关实验，处理及结果如下图所示。
研究人员判断B蛋白可以诱导自噬体的形成，依据是：敲除B蛋白基因后，____________组与____________组比较，细胞内自噬体数目____________；敲除后转入____________，____________组与____________组比较细胞内自噬体数目恢复；敲除后转入____________，____________组与____________组比较细胞内自噬体数目未恢复。
【答案】 空间结构 溶酶体 流动性 细胞内的稳态 b a 下降 正常B蛋白基因 c a、b B蛋白基因的突变基因 d a、b
【解析】试题分析：本实验为探究B蛋白对细胞自噬的作用，细胞自噬是细胞通过降解自身的非必需成分来提供营养和能量，也可以降解一些毒性成分以阻止细胞损伤和凋亡。细胞自噬中起关键作用的是溶酶体，溶酶体内部含有多种水解酶，主要功能是吞噬消化作用。有两种吞噬作用：一种是自体吞噬，另一种是异体吞噬。
（1）B蛋白在细胞质中的核糖体上合成，在细胞溶胶中折叠形成正确的空间结构。自噬体与溶酶体的融合依赖于膜的流动性。细胞自噬的意义是清除细胞内衰老损伤的细胞器或错误折叠的蛋白质分子，维持细胞内的稳态。
（2）根据图示分析：研究人员根据敲除B蛋白基因后（b组与a组比较），细胞内自噬体数目下降；敲除后转入正常B蛋白基因（c组与a、b组比较），细胞内自噬体数目恢复，敲除后转入B蛋白基因的突变基因（d组与a、b组比较），细胞内自噬体数目未恢复，可判断B蛋白可以诱导自噬体的形成。
【题目】研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂一内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题：
（1）从肝细胞中分离总RNA，经____________获得cDNA，之后经过____________扩增内皮抑素基因。
（2）扩增的目的基因与pUC18质粒（如下图所示）都用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体____________连接，还减少了____________的连接（答不全不给分），提高了重组质粒的比例。
（3）大肠杆菌pUC18质粒的lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。
选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入______物质。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成_________颜色的菌落，原因是__________________。之所以选择大肠杆菌作为基因工程的受体菌，其突出的优点是：________________________。（至少答出两点）
（4）从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37℃培养。将等量____________的粗提表达产物加进培养孔中，72h后在显微镜下观察细胞存活情况并________________________，实验结果如下表所示。
粗提表达产物浓度（μg/mL） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
活的内皮细胞数目（×lO2） | 12 | 6 | 2 | 1 | 0.5 | 0.5 |
实验结果说明________________________________________________。
