题目内容
【题目】科学家们发现长年生活在寒带的比目鱼不怕冻，因为比目鱼的身体里有一种抗冻蛋白质（AFP）。科学家将比目鱼的抗冻蛋白质基因转移到西红柿里，培育出了抗冻西红柿，这种西红柿可以在冬季或较寒冷的地区种植，使得人们一年到头都能吃到西红柿。下图为抗冻番茄的培育过程。据图回答：
（1）①过程为___________________，重组质粒除了含有目的基因外，还必须有_________________________________________________________________、复制原点。
（2）②过程常采用农杆菌转化法将AFP基因导入番茄细胞，除此之外，还可利用______________法（答出一种即可），③过程应用的主要技术是____________________________。
（3）若AFP基因已表达出抗冻蛋白，还需要进行个体水平的检测，如通过______________，以确定抗冻番茄植株是否具有抗寒特性。
【答案】基因表达载体的构建 启动子、终止子、标记基因 基因枪法（花粉管通道法） 植物组织培养 低温处理并观察番茄的抗冻情况
【解析】
该题通过将比目鱼中的抗冻基因转移到西红柿中，获取抗冻番茄为背景考查基因工程的相关知识。图示过程为：①属于基因表达载体的构建，②将目的基因导入受体细胞，③通过植物组织培养获得抗冻番茄植株。
1、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。2、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（1）①过程是将AFP基因与Ti质粒结合形成重组质粒的过程，属于基因表达载体的构建，为了使目的基因在受体细胞稳定存在，并且能够表达和发挥作用，重组质粒除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、标记基因和复制原点。
（2）将目的基因导入到植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；③过程是将含目的基因的番茄细胞诱导发育为转基因植株的过程，一般用植物组织培养技术。
（3）若需从个体水平检测抗冻番茄植株是否具有抗寒特性，可以通过低温处理并观察番茄的抗冻情况进行判断。
