题目内容
【题目】为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。制作RNA探针的基本流程如图所示：
请回答：
（1）步骤①中，需要使用的工具酶有 。
（2）步骤②中，用 处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入重组载体。
（3）步骤③中，用添加 的培养基培养大肠杆菌，挑选________（选填“蓝色”或“白色”）菌落中的大肠杆菌为重组菌。
（4）重组载体中SHH基因转录合成RNA探针时，________（选填“需要”或“不需要”）启动子。将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与____________________形成杂交带，进而判断SHH基因的 情况。
【答案】
（1）限制酶 DNA连接酶
（2）氯化钙溶液（或钙离子） 感受态
（3）氨苄青霉素 白色
（4）需要 SHH转录形成的mRNA 转录
【解析】
（1）步骤1是构建基因表达载体需要用限制酶和DNA连接酶。
（2）将外源基因导入微生物细胞中需要用氯化钙溶液处理大肠杆菌，使之成为容易接受外源DNA的感受态细胞。
（3）由图分析可知该表达载体上的标记基因是氨苄青霉素抗性，所以应用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，挑选白色的菌落，因为目的基因插入后破坏了LacZ基因。
（4）转录需要启动子，RNA聚合酶结合到启动子上启动转录，探针会与SHH基因转录形成的mRNA形成杂交带，有杂交带的出现，说明SHH基因转录成功。
生物种类 | 植物 | 动物 | 微生物 |
常用方法 | 农杆菌转化法 | 显微注射技术 | 感受态细胞法 |
受体细胞 | 体细胞或受精卵 | 受精卵 | 原核细胞 |
转化过程 | 将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞染色体的DNA上→表达 | 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 | Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 |
