题目内容
【题目】α1-抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该病患者常可采用注射人α1-抗胰蛋白酶来缓解症状。
（1）下图表示获取人α1-抗胰蛋白酶基因的两种方法，请回答下列问题：
①过程a是在_________酶的作用下完成的，该酶的作用特点是能识别某种特定的_________，并使特定部位的两个核苷酸之间的_________断裂。
②过程c需用_________ 酶，该过程需要的原料是_________。
③要确定获得的基因是否是所需的目的基因，可以从分子水平上利用_________技术检测该基因的碱基序列。
（2）利用转基因技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更易获得这种酶，简要过程如下图所示。
①获得目的基因后，常利用_________技术在体外讲行大量扩增。
②基因表达载体d，除图中的标出部分外，还必须含有 _________。载体上绿色荧光蛋白（GFP）基因的作用是便于_________。
【答案】限制核苷酸序列磷酸二酯键逆转录4种脱氧核苷酸DNA分子杂交PCR启动子、终止子筛选含有目的基因的受体细胞（或供重组DNA的鉴定和选择）
【解析】
分析图示，a表示切割目的基因，b表示转录，c表逆转录译，d表示基因表达载体。基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定；基因工程的工具有：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体；基因表达载体的组成包括：目的基因、启动子、终止子、标记基因。标记基因的作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
（1）①据图分析，a过程表示目的基因的获取，是在限制性核酸内切酶的作用下完成的，该酶的作用特点是识别特定的核苷酸序列，使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
②c过程为逆（或反）转录形成DNA，需要逆转录酶，原料是4种脱氧核苷酸。
③可以从分子水平上用DNA分子杂交检测获得的基因的碱基序列。
（2）①PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。获得目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增。
②基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其构建的目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体d中含有目的基因和标记基因，还必须含有启动子、终止子等；载体上绿色荧光蛋白（GFP）基因属于标记基因，目的是便于筛选含有目的基因的受体细胞。
【题目】南通某校生物兴趣小组利用“小液流法”估测黑藻叶片细胞的细胞液浓度，实验步骤和结果如下：
实验步骤：
①配制具有一定浓度梯度的蔗糖溶液。
②取12支干燥洁净的带塞试管，分成甲、乙两组，每组试管依次编为16号。向甲、乙两组相同编号的试管中加入相同浓度的蔗糖溶液4mL，迅速塞紧试管，备用。
③取大小相似的黑藻叶片60片，随机均分为6组，分别加入甲组的6支试管中，并塞紧试管。放置20min，期间多次摇动试管。再向甲组每支试管中均加入微量甲晞蓝粉末（忽略对蔗糖浓度的影响），充分摇匀。
④将乙组蔗糖溶液摇匀，用弯头毛细吸管从甲组试管中吸取少量蓝色溶液，插入乙组相同编号试管内的溶液中部，从毛细吸管一端轻轻挤出1小滴蓝色溶液（如下图）。观察蓝色小滴的升降情况，并做好记录。
实验结果：
乙组试管编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
加入的蔗糖溶液浓度/molL-1 | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 | 0.25 | 0.30 |
蓝色小滴升降情况 | ↓ | ↓ | ↓ | ↑ | ↑ | ↑ |
请回答下列问题：
（1）步骤②中，装有不同浓度蔗糖溶液的试管要及时塞紧的目的是______________。步骤③不同试管中加入的黑藻叶片的大小和数量要相同，这属于对实验_____________变量的控制。
（2）乙组试管1、2、3中蓝色小滴均下降，原因是_____________，其中下降最慢的是试管_____________中的蓝色小滴。
（3）取出甲组6支试管中的黑藻叶片进行显微观察，可发现试管_____________中的黑藻叶片细胞内叶绿体分布最密集。
（4）根据实验结果可估测黑藻叶片细胞的细胞液浓度介于_____________之间。若要使估测结果更准确，则实验思路是__________________________。