题目内容
【题目】2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)图中通过过程①②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
______________________________________________________________________
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来________，理由是：__________________________________________________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用的方法_____________。
(3)GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是__________________。
如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是避免器官移植发生________反应。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：________(用数字表示)。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
【答案】(1)①
②可以 因为形成的黏性末端是相同的(或是可以互补的)
(2)显微注射法 (3)用于重组DNA的检测和鉴定(鉴定受体细胞中是否含有目的基因) 免疫排斥
(4)②①③④
【解析】：（1）①质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端如图所示：
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，所以能够连接起来．
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术．
（3）目的基因能否在受体母猪体内稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上，这需要采用DNA分子杂交技术进行检测才能确定．
（4）采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列、①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸、③蓝色荧光蛋白基因的修饰和④表达出蓝色荧光蛋白．
