Question

【题目】乙型脑炎病毒（JEV）是一种RNA病毒，E蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用基因重组的方法构建了两种新型JEV疫苗：DNA疫苗和E蛋白疫苗，其流程如下图所示。请回答下列相关问题：

（1）过程①需要的酶为__________________。利用 PCR技术扩增E蛋白基因的原理是_____________，原料为__________________。与体内DNA复制相比，利用PCR技术扩增E蛋白基因不需要_________________酶。

（2）若将重组质粒EN导入的受体细胞为大肠杆菌，则通常需要用CaCl2溶液处理大肠杆菌，使之成为________________细胞。将重组质粒EN导入大肠杆菌和酵母菌时，所形成的E蛋白结构不完全相同，其原因是__________________。

（3）E蛋白基因和M质粒结合形成重组质粒EM的过程所涉及的工具酶有_____________________， 这些工具酶作用的化学键为__________________。经过重组质粒EM产生的DNA疫苗进入人体后，会导致机体产生___________________（填“特异性免疫”或“非特异性免疫”），从而达到预防乙型脑炎的目的。

Answer 1

【答案】逆（反）转录酶 DNA 双链复制 dATP 、dGTP、dCTP 、dTTP 解旋 感受态 大肠杆菌是原核生物，无内质网和高尔基体等细胞器，无法对蛋白质进--步加工；酵母菌是真核生物，可以对核糖体形成的蛋白质进行加工和修饰 限制酶和DNA连接酶 磷酸二酯键 特异性免疫

【解析】

1、分析图可知，①过程为逆转录，②过程为重组质粒的构建，③过程为目的基因导入受体细胞。

2、基因工程的工具酶：限制酶和DNA连接酶。

3、将目的基因导入大肠杆菌细胞，最常用的转化方法是用Ca2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞。

（1）过程①为逆转录过程，该过程需要逆（反）转录酶；PCR技术扩增基因的原理是DNA双链复制，原料为4种dNTP；通过PCR技术扩增目的基因时利用高温打开双链，不需要使用解旋酶。

（2）受体细胞若为细菌等微生物，则通常需要用CaCl2溶液处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞；大肠杆菌只有核糖体一种细胞器，无内质网和高尔基体，无法对蛋白质进一步加工，而酵母菌是真核生物可以对核糖体形成的蛋白质进行加工和修饰。

（3）构建重组质粒所涉及的工具酶有限制酶和DNA连接酶，作用的化学键为磷酸二酯键；DNA疫苗进入人体后，会通过转录和翻译过程产生抗原，引起机体产生特异性免疫。