题目内容
【题目】蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定，每一种蛋白质的分离纯化方法因其来源和性质的不同会有很大差异。回答下列有关提取和分离血红蛋白的问题:
(1)在样品处理过程中，首先要洗涤红细胞，目的是________，以利于后续步骤的分离纯化。在重复洗涤过程中，用的洗涤液是____。红细胞破碎后，通过离心法将血红蛋白从混合液中分离出来，图是分离结果示意图，其中_____(填图中序号)是血红蛋白，若图分层不明显，分析其原因是________________________。
(2)对血红蛋白进行凝胶色谱操作属于上述步中的______。此步骤中凝胶色谱柱的制作是关键，若制作过程中出现以下两种现象则需要重新装填凝胶色谱柱:①________________，②________________________。
(3)为进一步提高凝胶色谱操作分离出的血红蛋白的度，可采用__________的方法。
【答案】去除杂蛋白（或去除粘在红细胞上的血浆蛋白） 生理盐水 ③ 洗涤次数过少，未能除去血浆蛋白 纯化 色谱柱内出现气泡 洗脱液流干，露出凝胶颗粒 电泳
【解析】
本题考查血红蛋白的提取和分离实验的相关知识，意在考查考生独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用的能力。
（1）因血液中的红细胞表面粘有血浆蛋白，因此需用生理盐水反复冲洗以去除杂蛋白，若冲洗不彻底或洗涤次数过少，未能除去血浆蛋白时，就会导致离心分层时各种成分分离不明显；红细胞破碎经离心处理后，可得图示结果，其中③为血红蛋白；
（2）通过凝胶色谱法可以分离相对分子质量不同的蛋白质，属于上述流程中的纯化环节；此步骤要注意凝胶的装填要紧密、均匀，若出现①色谱柱内出现气泡或②洗脱液流干，露出凝胶颗粒时的情况时，则需要重新装填凝胶色谱柱；
（3）电泳可进一步提高凝胶色谱操作分离出的血红蛋白的纯度。
步骤 | 操作 |
样品处理 | 通过细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液等操作收集到血红蛋白溶液 |
粗分离 | 通过透析法去除血红蛋白溶液中的相对分子质量较小的杂质 |
纯化 | 通过凝胶色谱法分离相对分子质量不同的蛋白质 |
纯度鉴定 | SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳判断纯化的蛋白质是否达到要求 |
