Question

【题目】下表是某种微生物培养基的配方表，回答：

牛肉膏	蛋白胨	NaCl	琼脂	水
0．5g	1g	0．5g	2g	200mL

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（1）此培养基的营养成分有五类，其中蛋白胨提供的营养物质是__________。

（2）在培养基制备过程中，各种成分溶化后分装前，必须的操作是_______________。

（3）微生物培养最基本的要求是无菌操作。液体培养基应选用的灭菌方法是______________（填“高压蒸汽灭菌”或“干热灭菌”），不选另外一种的原因是_________________________。巴氏消毒法与煮沸消毒法相比，其优点是_________________。

（4）用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择群落在_________的平板进行计数。若统计出在一稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0．2mL，则每毫升样品中的细菌数为_________。

（5）纯化菌株时，通常使用的划线工具是_________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、维生素??? 调节pH??? 高压蒸汽灭菌??? 干热灭菌法针对耐高温需要保持干燥的物品，若选干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发??? 达到消毒目的的同时，营养物质损失较少??? 30～300??? 1.5×107??? 接种环??? 接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始???

【解析】

1、培养基的成分包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。

2、制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：计算→称量→溶化→调pH→灭菌→倒平板。

3、消毒和灭菌：

①消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。常见消毒方法有煮沸消毒、化学药物消毒、紫外线消毒等。

②灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

4、微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）微生物培养基的成分包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。蛋白胨在培养基可以为微生物提供碳源、氮源和维生素。

（2）配制培养基时为保证无菌，各种成分在溶化后分装前必须进行调节pH，然后再灭菌。

（3）液体培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，而干热灭菌法主要针对耐高温需要保持干燥的物品，若选干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发；与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法在较低温度下，既可以杀死病菌，又能保持物品中营养物质损失较少和风味不变。

（4）使用稀释涂布平板法统计活菌数目时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。若统计出在稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2mL，则每毫升样品中的细菌数为30÷0.2×105=1.5×107个。

（5）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有：接种环灼烧后未冷却，将菌种杀死；划线未从第一区域末端开始。