题目内容
以下是有关DNA粗提取实验的阅读材料:
A.核酸极不稳定,在较为剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制备DNA时要加入DNA酶(水解DNA的酶)的抑制剂柠檬酸钠,以除去Mg,防止DNA酶的激活。
B.核酸中的DNA和RNA在生物体内均以核蛋白(由核酸和蛋白质组成)的形式存在,DNA核蛋白在1mol NaCl溶液中溶解度很大,但在0.14mol·NaCl溶液中的溶解度很低;而RNA核蛋白溶于0.14mol· NaCl溶液。
C.用苯酚处理,可使蛋白质变性,且留在苯酚层内;在DNA溶液中加入2.5倍体积,浓度为95%的酒精,可将DNA分离出来。此时DNA十分粘稠,可用玻棒搅成团取出。
D.DNA在强酸环境下,水解产生脱氧核糖等小分子物质,它与二苯胺酸性溶液反应,能生成蓝色化合物。
E.实验材料与器械:柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14mol· NaCl溶液、1mol· NaCl溶液、蒸馏水、苯酚、95%酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻棒、量筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。
F.实验步骤:研磨得匀浆→过滤得滤液→滤液稀释6倍→离心处理得沉淀物 →沉淀物再溶解→加苯酚静置后去上清液→提取出DNA→DNA鉴定。
请阅读以上材料回答下列问题:
(1)研磨时,取10g花椰菜,加适量的石英砂和____________ 、____________。
(2)将滤液稀释6倍,其目的是______________________________________________。
(3)取沉淀物,置于2mL 1mol· NaCl 溶液中,使DNA核蛋白再次溶解,再加2mL苯酚充分震荡后静止,待其分层后弃其上层的苯酚。该步骤的目的是除去__________。
(4)如何将剩余溶液中的DNA提取出来? _____________________________________
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(5)如何证明提取物确实是DNA分子?________________________________________
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解析:
(1)1mol·NaCl溶液 柠檬酸钠 (2)使DNA核蛋白的溶解度逐渐降低 (3)蛋白质 (4)向下层DNA溶液中加2.5倍体积,浓度为95%的酒精,此时用玻棒搅动,在玻棒上的成团物即是DNA (5)用适量的浓硫酸处理提取物,再滴加二苯胺试剂数滴,如有蓝色物质出现即可证明提取物是DNA。
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