Question

【题目】研究发现HOXA7基因表达的蛋白质具有DNA结合及转录因子活性， 调控胚胎及成体细胞增殖、分化。科研人员对研究HOXA7基因在宫颈癌中的功能作用做了相关实验。请回答问题：

（1）癌细胞具有无限___________的特点，宫颈癌发生的根本原因是___________。

（2）利用_____酶分别对HOXA7基因干扰序列—si-HOXA7（可以与HOXA7的mRNA发生碱基互补配对）和载体（plent-U6-GFP）进行切割，并用___________酶连接，构建表达载体plent-U6-GFP/si-HOXA7， 并以空载体plent-U6- GFP（NC)为对照。将重组质粒plent-U6-GFP/si-HOXA7和对照质粒plent-U6-GFP用脂质体转染宫颈癌Siha细胞，获得实验组细胞（Siha/si-HOXA7）和对照组细胞（Siha/NC）。分别采用RT-PCR法和抗原—抗体杂交检测获得细胞中的HOXA7 mRNA（图1A）和HOXA7蛋白质（图1B）水平，结果如图1。

注：GAPDH和β-actin在各组织和细胞中的表达相对恒定，作为参照物。

与对照组相比，实验组HOXA7基因表达的mRNA和蛋白质______________，说明_________（成功/未成功）建立可以用于后续实验的Siha/si-HOXA7细胞系。

（3）为进一步研究HOXA7对宫颈癌细胞体外增殖能力的影响， 取实验组细胞Siha/si-HOXA7和对照组细胞Siha/NC培养， 检测细胞的平板克隆形成能力，结果如图2（A）；利用流式细胞术检测实验组和对照组的细胞周期，结果如图2（B）。

由图2（A）结果可知，与对照组相比，实验组细胞Siha/si-HOXA7_________，由此可以推测HOXA7基因能够________（促进或抑制）宫颈癌细胞体外增殖；结合流式细胞术检测结果，推测HOXA7对人宫颈癌细胞的作用机制是______________。

Answer 1

【答案】分裂（增殖） 原癌基因或抑癌基因突变 限制性内切（限制） DNA连接 均明显低于对照组 成功 克隆形成能力明显减弱（增殖能力减弱/细胞周期阻滞 ）继而导致细胞增殖能力降低 促进宫颈癌细胞体外增殖 G1期细胞增多， S期细胞减少

【解析】

据图分析，图1中A、B两图显示，与对照组相比，实验组细胞（Siha/si-HOXA7）的HOXA7表达产生的mRNA和蛋白质都比对照组少；图2A图显示，培养皿中实验组细胞（Siha/si-HOXA7）数量明显少于对照组，说明HOXA7基因能够促进宫颈癌细胞体外增殖。

（1）细胞癌变的根本原因是原癌基因或抑癌基因突变，癌细胞具有无限增殖等特点。

（2）切割基因和质粒应该用限制酶，连接切割后的质粒和目的基因应该用DNA连接酶；据图1分析，与对照组相比，实验组HOXA7基因表达的产生的mRNA和蛋白质含量都明显减少了，说明成功建立可以用于后续实验的Siha/si-HOXA7细胞系。

（3）据图2分析，A图显示右图培养皿中细胞数量明显少于左图培养皿，即实验组细胞Siha/si-HOXA7克隆形成能力明显减弱（增殖能力减弱/细胞周期阻滞 ）继而导致细胞增殖能力降低，结合以上分析可以推测HOXA7基因能够促进宫颈癌细胞体外增殖；结合流式细胞术检测结果，推测HOXA7对人宫颈癌细胞的作用机制是G1期细胞增多， S期细胞减少。