题目内容
【题目】通常DNA分子复制从一个复制起始点开始,有单向复制和双向复制,如图所示。
放射性越高的3H-胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3H-脱氧胸苷),在放射自显影技术的图像上,感光还原的银颗粒密度越高。请利用放射性自显影技术、低放射性3H-脱氧胸苷和高放射性3H-脱氧胸苷设计实验以确定大肠杆菌DNA复制的方向,回答下列问题:
(1)实验思路:复制开始时,首先用______培养大肠杆菌,一段时间后转移到______中继续培养,用放射自显影技术观察__________。
(2)实验结果和结论:_______________________________。
【答案】含低放射性3H-脱氧胸苷培养基 含有高放射性3H-脱氧胸苷的培养基 复制起点和复制起点两侧银颗粒密度情况 若复制起点处银颗粒密度低,一侧银颗粒密度高,则DNA分子复制为单向复制;若复制起点处银颗粒密度低,复制起点的两侧银颗粒密度高,则DNA分子复制为双向复制。
【解析】
由题意和图示信息准确把握实验目的(确定大肠杆菌DNA复制的方向),从中挖掘出隐含的信息:①利用3H-脱氧胸苷使新合成的同一条DNA子链上出现低放射性区段和高放射性区段;②利用放射性自显影技术,通过观察复制起点及其两侧银颗粒密度情况来判断DNA复制的方向。在此基础上对相关问题进行解答。
(1)依题意可知:该实验的目的是确定大肠杆菌DNA复制的方向。实验原理是:①放射性越高的3H-胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3H-脱氧胸苷)在放射自显影技术的图像上,感光还原的银颗粒密度越高。②3H-脱氧胸苷是DNA复制的原料,依据DNA的半保留复制,利用3H标记的低放射性和高放射性的脱氧胸苷使新形成的同一条DNA子链上出现低放射性区段和高放射性区段。③利用放射性自显影技术,检测子链上银颗粒密度的高低及其分布来判断DNA复制的方向。综上分析可知该实验思路为:复制开始时,首先用含低放射性3H-脱氧胸苷培养基培养大肠杆菌,一段时间后转移到含有高放射性3H-脱氧胸苷的培养基中继续培养,用放射自显影技术观察复制起点和复制起点两侧银颗粒密度情况。
(2)依据实验思路可知:若DNA分子复制为单向复制,则复制起点处银颗粒密度低,远离复制起点的一侧银颗粒密度高。若DNA分子复制为双向复制,则复制起点处银颗粒密度低,复制起点的两侧银颗粒密度高。
【题目】下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图,载体质粒P0具有四环素抗性基因(tet r)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答:
(1)EcoR V酶切P0形成的末端为______末端。
(2)通过PCR扩增获得的目的基因,其两端各自带有一个鸟嘌呤脱氧核苷酸。为了能使载体P1能与目的基因连接,可以用______酶处理,在两端各添加了一个碱基为______的脱氧核苷酸,形成P2。
(3)为筛选出含有重组质粒P3的菌落,采用含有不同抗生素的培养基进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“﹣”代表不生长)。结果表明,菌落______是符合要求的。
A | B | C | |
无抗生素 | + | + | + |
氨苄青霉素 | + | + | - |
四环素 | + | - | - |
氨苄青霉素+四环素 | + | - | - |
(4)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行PCR鉴定。如图所示为甲、乙、丙3条引物在正确的重组质粒中的相应位置。
①引物中A+T比例越高,PCR过程中退火温度越______。PCR中提供的酶是______。
②某学生用一对引物甲和乙从某一菌落的质粒中扩增出了400bp的片段,原因是______。PCR过程中需要提供引物的原因是______。