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【题目】生物·选修1:生物技术实践

某科研小组欲探究固定化果胶酶对黑莓出汁率的影响及水解温度对固定化果胶酶活性的影响,进行了一系列实验,实验结果如下图所示。请回答下列问题:

(1)固定化果胶酶常用化学结合法和__________法,而不宜用包埋法,理由是______________

(2)与实验组相比,对照组的不同处理是____________________;实验过程中,黑莓浆与固定化黑胶酶混合后需要振荡试管,目的是______________________________

(3)根据实验结果不能得出固定化果胶酶的最适温度是55℃的结论,理由是____________________;同一温度条件下,60℃时加入固定化果胶酶,黑莓的出汁率__________(填“有”或“没有”)提高,判断的依据是_________________________

(4)酶制剂不宜在最适温度下长期保存,宜在____________________条件下保存。

【答案】物理吸附 果胶酶分子小,易从包埋材料中漏出 不加固定化果胶酶 增加果胶酶与黑莓浆的接触面积 实验中的温度梯度太大 60℃时,实验组中出汁率仍高于对照组 低温

【解析】

固定化酶技术的应用:
a、固定化酶:固定化酶是指用物理学或化学的方法将酶与固相载体结合在一起形成的仍具有酶活性的酶复合物。在催化反应中,它以固相状态作用于底物,反应完成后,容易与水溶性反应物和产物分离,可被反复使用。
b、制备固定化酶:目前,制备固定化酶的方法主要有吸附法、交联法、包埋法等。吸附法的显著特点是工艺简便且条件温和,在生产实践中应用广泛;交联法是利用多功能试剂进行酶与载体之间的交联,在酶和多功能试剂之间形成共价键,从而得到三维的交联网架结构;包埋法是将酶包埋在能固化的载体中。
c、应用:固定化酶已被广泛地应用在人们的日常生活、医院、工业等方面。例如,固定化酶在新型青霉素的生产中具有重要作用。

1)固定化果胶酶常用物理吸附和化学结合法;由于果胶酶分子小,易从包埋材料中漏出,故不宜用包埋法固定化果胶酶。
2)分析图中数据可知,实验组均比对照组出汁率高,故与实验组相比,对照组的不同处理是不加固定化果胶酶;实验过程中振荡试管可增加果胶酶与黑莓浆的接触而积,使反应更充分。
3)从实验结果分析,由于温度梯度太大,不能得出固定化果胶酶的最适温度是55℃的结论;与对照组相比,同一温度条件下,60℃时加入固定化果胶酶,实验组中出汁率仍高于对照组,即黑莓的出汁率仍有提高,说明60℃时加入固定化果胶酶能提高出汁率。
4)酶制剂在最适温度下活性最高,但不宜在最适温度下长期保存,酶制剂宜在低温条件下保存。

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【题目】P115蛋白是高尔基体上重要的囊泡转运蛋白,与胃癌细胞增殖有关。为进一步确定P115与胃癌细胞增殖的关系,研究人员展开系列实验。

1)与P115蛋白合成和加工密切相关的细胞器有____________和高尔基体,P115蛋白的______与其作用效果密切相关。

2)分别收集100mg新鲜胃癌组织及正常胃粘膜组织,检测其中P115蛋白含量,两组相对值分别为0.750.35,由此推测胃癌细胞中__________________。进一步分别提取总RNA,测得P115mRNA相对值分别为0.70.5,初步证实上述推测是合理的。

3)为研究P115在胃癌细胞株增殖中的作用,研究人员构建了含有P115-shRNA的表达载体(P115-shRNA可使相应基因沉默),导入胃癌细胞株BGC-823,成功转染后检测各组P115蛋白含量,结果如下图。

①上图中12组为对照组,1组不导入质粒,2____________345组分别导入含有P115-shRNA1P115-shRNA2P115-shRNA3的表达载体。

②β-actin是一种细胞骨架蛋白,可以在实验中作为参考标准的原因是____

③选择上图中的第___组作为实验组,进一步测定不同培养时间各组细胞数量相对值,结果如下表。

分组

培养时间

1

2

实验组

0h

0.285

0.283

0.284

24h

0.453

0.454

0.384

48h

0.675

0.678

0.466

72h

0.981

0.991

0.605

此结果说明P115蛋白______________

④测定上述第12组和实验组处于细胞周期各时期细胞数,结果如下图。

由上图可知P115-shRNA通过__________来抑制胃癌细胞BGC-823增殖。

4)结合上述研究,提出治疗胃癌的思路___________

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