Question

【题目】苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．小明同学准备依据图1操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株．请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有___．

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐__．以达到富集酚降解菌的目的．若图1平板中菌落过于密集，应进一步___________，以便于菌落计数与分离．制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加 ___________ ．

（3）小明同学利用平板划线法纯化酚降解菌,他在培养基上共划了5个区域,则需要__________次(填数字)灼烧接种环.

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量．先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为__________________．

管号	1	2	3	4	5	6
苯酚浓度（mg/L）						1

如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_______（填序号：①5②10③20）倍后，再进行比色．

Answer 1

【答案】 蛋白胨、苯酚 增加 稀释涂布 凝固剂（琼脂） 6 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③

【解析】 稀释涂布平板法和平板划线法接种目的菌进行分离、纯化，前者主要应用于对目的菌进行计数，通过形成菌落来估算，后者仅仅是纯化菌种，但也需要挑选单菌落，所以二者都需要在固体培养基上完成培养。为了防止操作中、操作后造成杂菌污染，所以应注意每个环节中尽可能做到无菌操作，如对接种环的灼烧，在酒精灯的火焰旁进行接种环操作等等。

（1）从培养基内的成分来看，只有蛋白胨和苯酚内含有碳元素，因此可以作为碳源。

（2）因为最终要获得的菌株为可以高效降解酚的菌株，所以苯酚的用量应随转接次数增加而逐渐增加；稀释涂布平板法可以分离密集菌落，同时便于菌落的计数；平板培养基为固体培养基，在制备时除应加入的水及其他营养物质后，还需加入凝固剂（琼脂）。

（3）用平板划线法纯化目的菌（酚降解菌）,为了防止杂菌污染，每次划线前都要进行灼烧接种环，且最后依次划线结束后，为了防止菌种污染环境，还要再次灼烧接种环，所以5次划线，需要灼烧6次接种环。

（4）题干中提到要制作系列浓度梯度进行显色反应，共配制了六支比色管，所以六支比色管的浓度值依次分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1；废水中含有50mg/L 苯酚溶液，降解后剩余21%，则剩余中含有10.5mg/L 苯酚溶液，经过5倍或10倍稀释后分别为2.1mg/L 和1.05mg/L ，不在比色区间内，而20倍稀释后浓度为0.5mg/L ，在比色区间内，因此要稀释20倍后再进行比色。