Question

【题目】编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示．

回答下列问题：
（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是 ．
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为 ， 加入了作为合成DNA的原料．
（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2．
①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是 ． 细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是 ．
②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．

Answer 1

【答案】
（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动
（2）模板DNA；4种脱氧核苷酸
（3）细胞培养（传代培养）；维持培养液中的PH；C
【解析】解：（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动编码蛋白乙的DNA序列的转录，因此所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙．（2）PCR技术扩增目的基因的条件需要：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．序列甲作为模板DNA，DNA的原料为4种脱氧核苷酸．（3）①动物细胞可以通过细胞培养（传代培养）继续增殖．细胞培养过程中，需要气体环境，其中气体CO2的作用是维持培养液中的PH．②分析坐标图：对比甲和乙蛋白刺激T淋巴细胞增殖情况发现：最终效果相当，只是增殖时间不同，可以推断出A、E片段编码的肽段不会降低T淋巴细胞增殖效果．将丙蛋白分别与甲和乙蛋白刺激T淋巴细胞增殖情况比较发现：丙蛋白降低了T淋巴细胞增殖．丙基因与甲和乙基因相比较，缺少了一段C基因，也就是说若缺少C片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．
故答案为：（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动（2）模板DNA 4种脱氧核苷酸（3）细胞培养（传代培养） 维持培养液中的PH（4）C
1、PCR技术扩增目的基因（适用于目的基因的核苷酸序列已知的情况）．PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，其原理是DNA复制，需要模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），以指数的方式扩增，即约2n．引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点．2、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端．（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因．3、动物细胞培养条件：（1）无菌无毒环境：无菌﹣﹣对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素．；无毒﹣﹣定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害．（2）营养：
成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分．
培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基）（3）温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4．（4）气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进行培养．O2：是细胞代谢所必需的 CO2主要作用是维持培养液的pH．