Question

【题目】科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图1：
（1）步骤①的技术名称是 ．
（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有 ．
（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的 ． 由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2A、B、C、D四种单链DNA片段中选取作为引物．对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为或 ．
（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用的方法．

Answer 1

【答案】
（1）细胞核
（2）ES细胞具有全能性
（3）基因表达载体；B和C；HindⅢ和PstⅠ；EcoRⅠ和PstⅠ
（4）绿；抗原﹣抗体杂交
【解析】解：（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有全能性．（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；DNA复制只能从5’到3’，因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C作为引物．由图可知，SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割时会破坏红色荧光蛋白基因，但不会破坏绿色荧光蛋白基因，因此将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用抗原﹣抗体杂交法． 所以答案是：（1）细胞核；（2）ES细胞具有全能性；（3）基因表达载体；B和C；HindⅢ和PstⅠ；EcoRⅠ和PstⅠ；（4）绿；抗原﹣抗体杂交
【考点精析】本题主要考查了基因工程的原理及技术和动物细胞核移植技术的相关知识点，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术；动物体细胞核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育为动物个体才能正确解答此题．