题目内容
【题目】已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，制备抗A蛋白抗体的部分流程如下图． 
请回答：
（1）①代表的是过程．为获得A基因表达载体，需用酶对A基因和运载体进行切割．将A基因表达载体导入动物细胞常用的方法是 ．
（2）利用PCR技术扩增A基因时，设计引物序列的主要依据是 ， 加入引物的作用是 ．
（3）与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制等条件．
（4）过程③采用的技术是 ， 获得的X叫细胞．
【答案】
（1）逆转录；限制；显微注射法
（2）A基因两端的部分核苷酸序列；与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸
（3）温度
（4）动物细胞融合；杂交瘤
【解析】解：（1）由以上分可知①是逆转录过程．构建基因表达载体时，首先需要用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．（2）利用PCR技术扩增A基因时，根据A基因两端的部分核苷酸序列设计引物序列，加入引物的作用是与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸．（3）PCR扩增目的基因的过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．因此，与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制温度等条件．（4）③过程需要采用动物细胞融合技术，根据图中信息可知X为杂交瘤细胞． 所以答案是：（1）逆转录 限制 显微注射法（2）A基因两端的部分核苷酸序列 与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸（3）温度（4）动物细胞融合 杂交瘤
【考点精析】通过灵活运用基因工程的原理及技术和单克隆抗体的制备，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术；对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞；然后对它进行克隆化培养和抗体检测；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体即可以解答此题．
【题目】萌发的小麦种子中α﹣淀粉酶和β﹣淀粉酶的含量显著增高。α﹣淀粉酶不耐酸、较耐热，在pH为3.6、0℃下可迅速失活，而β﹣淀粉酶耐酸、不耐热，在70℃条件下15min后失活。根据它们的这种特性，可分别测定一种酶的催化效率。某实验小组进行了“提取小麦种子中α﹣淀粉酶并测定α﹣淀粉酶催化淀粉水解的最适温度”的相关实验。
实验材料：萌发3天的小麦种子（芽长约1cm）。
主要试剂及仪器：1mg/mL的标准麦芽糖溶液、5%的可溶性淀粉溶液、碘液、蒸馏水、石英砂、恒温水浴锅等。实验步骤：
步骤一：制备酶溶液。
步骤二： __________________________________ ，取出后冷却。
步骤三：取6支干净的、体积相同并具刻度的试管依次编号，按下表要求加入试剂，再观察各试管内的颜色变化。（注：+表示碘液变蓝色，﹣表示碘液不变色）
试管编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
5%的可溶性淀粉溶液（mL） | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 |
恒温水浴5min（℃） | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
α﹣淀粉酶保持活性而β﹣淀粉酶失去活性的溶液（mL） | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
恒温水浴5min（℃） | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
溶液混合，振荡后恒温水浴5min（℃） | 0 | 20 | 40 | p>60 | 80 | 100 |
加入碘液，振荡后观察颜色变化 | +++ | ++ | + | ﹣ | ++ | +++ |
请回答下列问题：
（1）选用萌发的小麦种子提取酶液的主要理由是 ________________。
（2）步骤二的具体操作是___________________________________________。
（3）该实验中能否选用斐林试剂检测实验结果？__（能/不能）。理由是 _________________
（4）若要进一步研究小麦种子中β﹣淀粉酶的最适温度，则需获得β﹣淀粉酶保持活性而α﹣淀粉酶失活的酶溶液．请简要写出制备该种酶溶液的方法__________________________________________ 。
