Question

【题目】下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图：

请据图回答：

（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在 酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的 序列，再通过化学方法合成所需基因。

（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、4种脱氧核苷酸三磷酸和 酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

（3）在基因工程中，利用大肠杆菌生产胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子，其中启动子的作用是 。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用 处理大肠杆菌，其目的是使其成为 细胞，有利于吸收重组DNA分子。为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可利用 技术；为了检测胰岛素基因转录出的mRNA是否翻译成蛋白质，常用 技术。

Answer 1

【答案】（1）逆转录（或“反转录”） 脱氧核苷酸

（2）引物 模板（A基因）（两空可调换位置） 热稳定DNA聚合（或“Taq”）

（3）RNA聚合酶识别和结合的部位 Ca2＋ 感受态 分子杂交 抗原—抗体杂交

【解析】

试题分析：（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，合成合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的脱氧核苷酸序列，再通过人工合成（化学）方法合成所需基因。

（2）利用PCR技术扩增DNA时所需的条件：引物、模板DNA（目的基因或A基因）、原料（4种脱氧核糖核苷酸）和耐热性的DNA聚合酶等。

（3）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使大肠杆菌变成感受态细胞，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为DNA分子杂交技术．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用抗原-抗体杂交技术。