题目内容
温度会影响微生物的生存和繁殖。下表为大肠杆菌在不同温度下繁殖1代所用的时间（min）。根据表格可直接得出哪项结论（ ）
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温度 |
10℃ |
15℃ |
20℃ |
25℃ |
30℃ |
35℃ |
40℃ |
45℃ |
50℃ |
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时间 |
860 |
120 |
90 |
40 |
29 |
22 |
15 |
20 |
80 |
A．10℃时细菌繁殖最快 B．温度越高酶活性越强
C．低温可抑制细菌繁殖 D．酶的活性受时间控制
C
【解析】
（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
| 反应条件 | ||
| | 温度 | 时间 |
| 变 性 | 95℃ | 30s |
| 复 性 | 55℃ | 30s |
| 延 伸 | 72℃ | 1min |
| 30个循环后 | 适宜 | 5-10min |
| 保 温 | 4℃ | 2h |
| PCR反应体系 | 50ul |
| 缓冲液 | 5ul |
| 脱氧核苷酸 | 1ul |
| 引物A | 0.5ul |
| 引物B | 0.5ul |
| DNA聚合酶 | 0.5U |
| 模板DNA | 1-2ul |
| 加去离子水补足至50 ul | |
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
（10分）圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
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反应条件 |
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温度 |
时间 |
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变 性 |
95℃ |
30s |
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复 性 |
55℃ |
30s |
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延 伸 |
72℃ |
1min |
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30个循环后 |
适宜 |
5-10min |
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保 温 |
4℃ |
2h |
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PCR反应体系 |
50ul |
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缓冲液 |
5ul |
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脱氧核苷酸 |
1ul |
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引物A |
0.5ul |
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引物B |
0.5ul |
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DNA聚合酶 |
0.5U |
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模板DNA |
1-2ul |
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加去离子水补足至50 ul |
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是 。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
[生物
选修1生物技术实践]（15分）苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋，再兑以苹果汁等原料而成的饮品。既有淡淡的醋味，又有果汁的香甜，喝起来非常爽口。苹果醋还能保健养生、改善疲劳、美容养颜，是目前大众非常喜爱的饮品。下图是苹果醋的制作简图，据图回答：
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（1）在图中苹果汁的生产中，为了提高出汁率需要添加的酶是 。
（2）过程①中使用到的微生物是 ，为了提高该微生物的利用率，最好用固定化细胞技术中的 法对其进行固定。若要检测是否产生了苹果酒可用
试剂进行检测。
（3）过程②和过程③中起作用的微生物都是 ，但过程②和过程③该微生物分解的碳源不同，过程②和过程③的碳源分别是 、 ，产生醋时该微生物可以从食醋中分离纯化获得，具体方法是：
第一步：配置培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的基本营养成分。
第二步：对培养基用 方法进行灭菌。
第三步：接种。微生物常用的接种方法有： 、 。
第四步：培养。温度控制在 ，培养时是否需要提供氧气？ 。一般应采用平板倒置培养，原因是 。
第五步：挑选符合要求的菌落。
（4）用萃取法提取胡萝卜素，萃取的效率主要取决于 ，同时还受原料颗粒的大小、含水量等条件的影响；在对新鲜胡萝卜进行干燥时，要注意控制 ，否则会引起胡萝卜素的分解。
圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
①分别配置 的培养基和 的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
②分别向A、B培养基接种 ；
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株，分别接种到 中；
⑤ 。
（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
| PCR反应体系 | 50ul |
| 缓冲液 | 5ul |
| 脱氧核苷酸 | 1ul |
| 引物A | 0.5ul |
| 引物B | 0.5ul |
| DNA聚合酶 | 0.5U |
| 模板DNA | 1-2ul |
| 加去离子水补足至50 ul | |
| 反应条件 | ||
| 温度 | 时间 | |
| 变 性 | 95℃ | 30s |
| 复 性 | 55℃ | 30s |
| 延 伸 | 72℃ | 1min |
| 30个循环后 | 适宜 | 5-10min |
| 保 温 | 4℃ | 2h |
①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是 。
此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。
（3）在对固氮基因产物的生产研究中，需要从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示蛋白质提取和分离实验涉及的相关原理。
①图甲表示相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶色谱法分离的过程。试管中收集到的液体最先出现的是相对分子质量较大的蛋白质，原因是 。
②图乙所示实验模拟电泳现象，U型管左侧的颜色逐渐变深，原因是 。
