题目内容
（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：（l）基因工程的核心是_______________________________。(2)构建基因表达载体时，可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用 酶，分别对目的基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为 种和 种。（3）要筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应首先选择含 的培养基中筛选番茄组织细胞。（4）研究人员通常采用 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.(5)基因工程操作中的第四步是目的基因的检测与鉴定,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用 __________ 技术，。采用 __________ 方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达。(6)图中③④分别指的是 、 ,欲获得人工种子应培养到___________阶段。将II细胞培养成完整植物体所用技术的理论基础是___________________________。
（每空1分，共10分）我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答： （1）一个完整的基因表达载体除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有复制原点、启动子、终止子和__________________。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，它是___________酶识别和结合的部位；而起始密码子的化学本质则是________（DNA/RNA）。（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过DNA分子杂交技术，来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的__________________上。（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用__________________处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含________________________________的混合气体培养箱中进行培养。（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将__________________一并吸出。（5）去核的卵母细胞与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞。利用物理或化学方法刺激重组细胞，使之完成细胞______________________________，在体外培养成重组早期胚胎。（6）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________________处理。（7）本实验所用到的现代生物科学技术有____________________________（填序号）。A.动物细胞培养 B.胚胎移植C.胚胎细胞核移植 D.DNA重组技术
基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：
（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的 与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和 。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是 。
（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（ ）
A．促使目的基因导入受体细胞中 B．促使目的基因在寄主细胞中复制
C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功
（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？
（10分）干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入羊的DNA中，培育出羊乳腺生物发生器，使羊乳汁中含有人体干扰素请回答：
（1）科学家将人的干扰素基因与乳腺蛋白基因的______________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的___________细胞中，然后，将该细胞送入母体内，使其生长发育成为______动物。
（2）人体干扰素基因之所以能“插入”到羊的DNA内，原因是_________________________。
（3）请在下框中画出某DNA片段被切割形成黏性末端的过程示意图。
（4）如何检测和鉴定人的干扰素因素已被成功导入羊体内？请写出两种方法：
________________________、________________________。
（每空1分，共10分）我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
（1）一个完整的基因表达载体除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有复制原点、启动子、终止子和________
__________。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，它是___________酶识别和结合的部位；而起始密码子的化学本质则是________（DNA/RNA）。（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过DNA分子杂交技术，来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的__________________上。
（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用__________________处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含________________________________的混合气体培养箱中进行培养。
（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将__________________一并吸出。
（5）去核的卵母细胞与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞。利用物理或化学方法刺激重组细胞，使之完成细胞______________________________，在体外培养成重组早期胚胎。
（6）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________________处理。
（7）本实验所用到的现代生物科学技术有____________________________（填序号）。
A.动物细胞培养 B.胚胎移植
C.胚胎细胞核移植 D.DNA重组技术
