Question

【题目】λ噬菌体有极强的侵染能力，能在细菌中快速进行DNA复制，产生子代噬菌体，最终导致细菌破裂（称为溶菌状态）；或者整合到细菌基因组中潜伏起来，不产生子代噬菌体（称为溶原状态）。在转基因技术中常用λ噬菌体构建基因克隆载体，使其在受体细菌中大量扩增外源DNA，以备研究使用。相关操作如下图所示，请回答：

（1）在构建基因克隆载体时，可被噬菌体蛋白质包装的DNA长度约为36～51kb，则经人工改造的λgtl0载体可插入的外源DNA的最大长度为______kb。为获得较大的插入能力，可删除λ噬菌体DNA组成中的______序列以缩短其长度。

（2）构建基因克隆载体时，需用到的酶是______。λ噬菌体DNA上通常没有适合的标记基因，因此人工改造时需加装适合的标记基因，如下图λgtl0载体中的imm434基因，该基因编码一种阻止λ噬菌体进入溶菌状态的阻遏物。外源DNA的插入位置应位于imm434基因______（之中/之外），使经侵染培养后的受体菌处于______状态，表明已成功导入目的基因。

（3）合成噬菌体所需的小分子原料主要是_____________。分离纯化噬菌体重组DNA时，将经培养10小时左右的大肠杆菌=噬菌体的培养液超速离心，从______________（上清液、沉淀物）获得噬菌体。

Answer 1

【答案】 7.6kb 中部 限制酶和DNA连接酶 之中 溶菌 氨基酸和脱氧核苷酸 上清液

【解析】（1）在构建基因克隆载体时，可被噬菌体蛋白质包装的DNA长度约为36～51kb，经人工改造的λgtl0载体的DNA长度为43.4kb，则可插入的外源DNA的最大长度为7.6kb。为获得较大的插入能力，可删除λ噬菌体DNA组成中的中部序列（控制溶原生长）以缩短其长度。

（2）构建基因克隆载体时，需用到的酶是限制酶和DNA连接酶。由于imm434基因编码一种阻止λ噬菌体进入溶菌状态的阻遏物，因此外源DNA的插入位置应位于imm434基因之中，可以破坏imm434基因，使λ噬菌体能进入溶菌状态，使经侵染培养后的受体菌处于溶菌状态，表明已成功导入目的基因。

（3）噬菌体主要由蛋白质和DNA组成，则合成噬菌体所需的小分子原料主要是氨基酸和脱氧核苷酸。分离纯化噬菌体重组DNA时，将经培养10小时左右的大肠杆菌与噬菌体的培养液超速离心，从上清液获得噬菌体。