【题目】卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用,此外,卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因(雄性不育基因)转入葡萄细胞,利用卡那霉素和头孢霉素,通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答:

1)构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒,导入农杆菌,在固体培养基中培养形成 以便鉴定是否混有杂菌,再用 将农杆菌转移至LB 培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是

2)将经过 的幼嫩葡萄叶片切成小块,浸入农杆菌悬浮液中,4分钟后取出(此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上)并接种到固体培养基中。培养至第3天时,可以看到在叶片小块周围出现 和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块,其目的是

A.抑制葡萄细胞脱分化

B.促进葡萄细胞再分化

C.杀灭农杆菌

D.促进农杆菌生长)。

3)将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后,转移至生芽培养基中,待其长出 后,再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着 作用,植物克隆的技术基础是

4)在卡那霉素培养基中,由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用,获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗,因此还需对试管苗的 基因的表达产物进行生化检测,才能鉴别出真正的转基因试管苗。

5)最后,对转基因试管苗还需进行逐渐 湿度的锻炼,使之适应自然环境。

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