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【题目】【生物—选修3:现代生物科技专题】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图:
(1)步骤①中所选的卵母细胞应处于 期。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其 分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为 的特点。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的 。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成 ,利用 技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。
【答案】(1)减数第二次分裂中(MⅡ中)
(2)内细胞团 体积小、细胞核大、核仁明显
(3)表达载体(重组质粒) 引物 PCR Hind Ⅲ和PstⅠ
【解析】(1)步骤①为核移植,所选的卵母细胞应处于减数第二次分裂中(MⅡ中)。
(2)重组胚胎培养到囊胚期时,可从其内细胞团中分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显。
(3)步骤③中表示将Rag2基因(目的基因)导入ES细胞(受体细胞),此过程需要构建含有Rag2基因的表达载体(重组质粒)。设计引物要遵循碱基互补配对原则,所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计。可利用PCR技术扩增Rag2基因片段。Rag2基因片段是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割获得,所以表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。
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