Question

【题目】人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种糖蛋白，具有很高的药用价值，可以通过生物工程大量生产。下图为含htPA基因的表达载体。请回答下列相关问题：

(1)限制酶主要是从________中获得，其特点是能够识别DNA分子的_________，并在特定位点切割DNA。质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切位点，其作用是______。

(2)构建基因组文库是获取目的基因的常用方法，与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少，原因是________。

(3)作为受体细胞的酵母茵缺失URA3基因，必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活，因此，图示表达载体上的URA3基因可作为____，供鉴定和选择；为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌，所使用的培养基____（填“需要”“不需要”）添加尿嘧啶。

(4)若要在羊乳中获得htPA，为了获得转基因母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行________。若在转htPA基因羊的羊乳中检测到____，说明目的基因成功表达。

Answer 1

【答案】原核生物（或微生物） 特定的（脱氧）核苷酸序列 供外源DNA片段（基因）插入 cDNA文库只能收集到生物发育到某时期已发生转录的基因，（而基因组文库能收集到全部基因） 标记基因 不需要 性别鉴定 htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

【解析】

1、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。2、目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。

3、该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植。

（1）限制酶主要是从原核生物（或原核细胞）中分离纯化出来的。每一种限制性酶可以识别特定的（脱氧）核苷酸序列。质粒DNA分子可用作载体，其上有一个至多个限制酶切位点，其作用是供外源DNA片段（基因）插入。

（2）cDNA文库只能收集到生物发育到某时期已发生转录的基因，（而基因组文库能收集到全部基因）故与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少。

（3）图示表达载体上的URA3基因可作为标记基因，供鉴定和选择；由于缺失URA3基因的酵母菌必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活，重组质粒中含有URA3基因，为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌，即所使用的培养基不需要添加尿嘧啶，如果能存活，说明导入成功；如不能存活，说明没有成功。

（4）只有母羊能分泌乳汁，为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定；若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达。