Question

【题目】如图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图，请回答相关问题。

		杂交细胞
		A	B	C
人类 染色体	1	－	＋	＋
	2	＋	－	＋
	3	＋	＋	－
酶	m	＋	－	＋
	n	－	＋	＋
	p	＋	－	＋
	q	－	＋	＋

(1)图示方法是__________技术的应用，该技术的基础是____________技术。

(2)操作所用的成纤维细胞应传代________代以内，诱导融合时需要加入的促融剂是_____。

(3)人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成________细胞，再经过一次_________，形成单核细胞。

(4)HAT培养基起________培养作用，培养时温度应为________℃，操作中加入乌本苷的目的是____________________________。

(5)如表所示为杂交细胞A、B、C中存在的人类染色体及人类特有的4种酶(“＋”表示存在，“－”表示不存在)，这4种酶均为单基因编码产生，据表判断，编码________酶的基因位于染色体2上，排列方式呈________。

Answer 1

【答案】(1)动物细胞融合 动物细胞培养

(2)10 PEG(或灭活病毒)

(3)多核 有丝分裂

(4)选择 36.5±0.5 除去未发生融合的细胞（出去成纤维细胞）

(5)m和p线性

【解析】（1）由图分析，该过程为动物细胞融合，其基础是动物细胞培养。

（2）目前使用的正常细胞通常为10代以内的，可以保持细胞正常的二倍体核型。诱导两个动物细胞融合，原理是细胞膜的流动性；可以采用物理（离心、振动）、化学（PEG）、生物诱导（灭活的病毒）融合方法，其中区别于植物原生质体融合的是生物诱导融合中采用的灭活病毒。

（3）成纤维细胞能在HAT培养基上存活，小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活，说明HAT培养基属于选择培养基，其中需要加入血浆等天然物质。

（4）培养动物细胞时一般pH设置为7.2-7.4；诱导细胞融合后，培养基中会出现3中融合细胞，成纤维细胞自身融合、骨髓瘤细胞自身融合和杂交瘤细胞，为了除去成纤维细胞，则需要在培养基中加入乌本苷。

（5）据表判断，杂交细胞A中存在2和3号染色体，表达出酶m和p；杂交细胞B存在1和2号染色体，表达出酶n和q；说明编码m和p酶的基因位于染色体2上，且呈线性排列。