Question

【题目】请回答以下有关基因工程的问题：

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是______________。DNA连接酶根据其来源不同，分为__________和___________。

（2）利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_______。该过程中需要的酶是___________。

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是_______________，依据该法的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的_______上，经过转化作用，进入植物细胞，并将其插入到____________，从而使其得以维持稳定和表达。

Answer 1

【答案】限制性核酸内切酶（限制酶）??? E·coli DNA连接酶??? T4DNA连接酶??? 引物??? 耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）??? 农杆菌转化法??? T-DNA??? 植物细胞染色体的DNA上???

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶）。DNA连接酶根据其来源于大肠杆菌或T4噬菌体，分为E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。

（2）利用PCR技术扩增目的基因需要一段已知目的基因的核苷酸序列，即引物，PCR技术中有高温解旋的步骤，因此需要耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）。

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，这种方法是利用农杆菌能侵染双子叶植物的特点，将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，经过转化作用，进入植物细胞，并将其插入到植物细胞染色体的DNA上，从而使其得以维持稳定和表达。