题目内容
【题目】酒是以水、高粱、小麦为原料，通过固态发酵而成。环境中存在的独特微生物是酿制酒独特品质的关键因素之一。为了提取环境中的独特菌种，某高中学校生物研究性学习小组以优质的高粱和小麦为原料，制作培养基，搜集、分离空气中的微生物。请回答下列问题：
（1）该培养基在接种微生物前，必须先进行_____灭菌。
（2）将上述培养基暴露在空气中培养一段时间后，取10g该培养基用无菌水制成100mL样品溶液。再将样品溶液稀释104倍后，各取样品溶液0.1mL，在5个培养基平板上接种。培养一段时间后，平板上长出的微生物菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是_____。每克培养基样品中的微生物数量是_____个。
（3）与用血细胞计数板记数相比，该计数方法测得的微生物数目要低。其原因是_____________ 。
（4）酿酒的主要微生物将葡萄糖分解为酒精的酶存在于_____。其生产酒的总反应式可表示为_____。
（5）为了研究发酵罐中酿酒微生物的生长情况，常要取样统计分析，并测定pH。若某同学未将取样的样品贴上标签，那么，怎样确定取样样品的先后顺序_____。主要依据是_____。
【答案】高压蒸汽 稀释涂布平板法 1.75×108 死亡的微生物不能形成菌落；两个或多个菌体连在一起时形成一个菌落 细胞质基质 
根据发酵液的pH大小排序 微生物发酵过程中发酵液的pH值逐渐变小
【解析】
微生物常见的接种的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数。参与酿酒的微生物是酵母菌，代谢类型为异养兼性厌氧型，在有氧条件下，酵母菌大量繁殖，反应式为
，无氧条件下进行酒精发酵，反应式为。
（1）培养基灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。
（2）根据题干可知，菌落计数采用的方法为稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30~300之间，故选菌落数为156、178和191的平板计数。每克培养基样品中的微生物数量对应的应该是每毫升样品溶液中的微生物数量，因此每克培养基样品中的微生物数量为（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108个。
（3）由于死亡的微生物不能形成菌落，以及两个或多个菌体连在一起时形成一个菌落，往往统计的是一个菌落，所以用稀释涂布平板法测得的微生物数目要低。
（4）酿酒的主要微生物是酵母菌，酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖分解为酒精，无氧呼吸的场所是细胞质基质，总反应式为。
（5）发酵过程会产生CO2使培养液pH逐渐降低，因此根据发酵液的pH大小确定取样样品的先后顺序。
