题目内容
【题目】动物细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。现在已经广泛应用于多种研究工作中,特别是新发展起来的杂交瘤技术,为制备单克隆抗体开辟了新途径。研究表明DNA合成有两条途径:“S途径”和“D途径”,淋巴细胞(B淋巴细胞)有“S途径”和“D途径”;骨髓瘤细胞只有“D途径”;HAT培养液中氨基喋呤可以阻断DNA合成的“D途径”。下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。回答下列问题:
（1）_______、_______技术是制备单克隆抗体的基础。
（2）单克隆抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是_________。
（3）杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的____________________________的特点,又具备淋巴细胞的_______的特点。
（4）图示用HAT培养液筛选出杂交瘤细胞的过程中,融合的淋巴细胞(B淋巴细胞)在HAT培养液中不生长的原因是_________,融合的骨髓瘤细胞在HAT培养液中不生长的原因是_____________________________________________
【答案】动物细胞融合 动物细胞培养 特异性强、灵敏度高,可大量制备 在体外大量增殖(无限增殖) 分泌特异性抗体 缺乏在体外培养液中增殖的能力 其DNA合成途径被氨基喋呤阻断而不能进行DNA复制
【解析】
单克隆抗体制备过程中两次筛选的方法及目的：
项目 | 第一次筛选 | 第二次筛选 |
筛选原因 | 诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 | 由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞 |
筛选方法 | 用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞（“BB”细胞、“瘤瘤”细胞）都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞（“B瘤”细胞）才能生长 | 用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群 |
筛选目的 | 得到杂交瘤细胞 | 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 |
（1）制备单克隆抗体过程为：将能够产生抗体的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得既能产生抗体、又能无限增殖的杂种细胞，然后将其在体外或体内条件下大规模培养，获得大量特异性抗体。因此单克隆抗体技术的基础是细胞培养技术和细胞融合技术。
（2）与常规的血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点在于它的特异性强、灵敏度高，并可能大量制备。
（3）杂交瘤细胞是骨髓瘤细胞和淋巴细胞融合形成的杂种细胞，具备两种细胞的特点，既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。
（4）HAT选择培养基含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径，即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）的作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成都不能发生。用于杂交的骨髓瘤细胞不含TK和HGPRT，故单个或融合骨髓瘤细胞将在HAT培养液中死亡。B淋巴细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外培养条件下难以长期存活和增殖传代。因此只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。综上所述，图示用HAT培养液筛选出杂交瘤细胞的过程中，融合的淋巴细胞(B淋巴细胞)在HAT培养液中不生长的原因是缺乏在体外培养液中增殖的能力，融合的骨髓瘤细胞在HAT培养液中不生长的原因是其DNA合成途径被氨基喋呤阻断而不能进行DNA复制。
