题目内容
【题目】酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：
（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的____________________，及时对培养基进行分装，并进行____________________灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约_______________（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有___________________。
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和__________________供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_______色细胞的个数应不少于__________，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。
【答案】pH 高压蒸汽（湿热） 50 ℃ a、b、d 氧气 无 30
【解析】
配制培养基的操作步骤为称量→溶化→定容→调pH→培养基的分装→包扎→灭菌。据图分析，从土壤样品中分离该类酵母的实验流程为①称量土样→②梯度稀释→③平板浇注分离→④划线纯化→⑤扩大培养。
（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量、溶化，然后调节培养基的pH并对培养基进行分装，接着利用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
（2）在步骤③中待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板。
（3）接种针、接种环使用前都必须灭菌，做到无菌操作，a正确；划线时应避免划破培养基表面，以防止大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c错误；可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株，d正确。
（4）酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气；活细胞膜具有选择透过性，经等体积台盼蓝染液染色，无色细胞才能计数；为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数（假设为n），达到每毫升3×109个活细胞的预期密度，而台盼蓝与菌液等体积加入，则n÷80×400÷（0.1×103）×1000÷2=3×109，n=30，即每个中方格中酵母菌不少于30。
