Question

【题目】为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得转基因油菜品种。

（1）研究人员从陆地棉细胞中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，如图为所示限制酶的识别位点。这样可以用 （填酶）处理两个基因后，可得到____________端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入如图2所示Ti质粒的T-DNA中。构建充足质粒并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

（3）剪取油菜的叶片放入染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，经筛选后再将该油菜细胞通过植物组织培养获得转获因油菜。整个过程涉及的原理是 。

Answer 1

【答案】（1）Cla 1（限制酶）和DNA连接酶 A、D

（2）四环素

（3）基因重组和植物细胞的全能性

【解析】

试题分析：（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，其原理为基因重组和植物细胞具有全能性。