Question

【题目】胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一．如图是该方法所用的基因表达载体，请回答下列问题：
（1）图中基因表达载体中没有标注出来的基本结构是 ．
（2）图中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是 ．
（3）构建基因表达载体时必需的工具酶有 ．
（4）β﹣半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于 ．
（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β﹣半乳糖苷酶被切成多个肽段，其原因可能是 ．

Answer 1

【答案】
（1）终止子
（2）RNA聚合；作为标记基因,将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来
（3）限制酶和DNA连接酶
（4）防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解
（5）β﹣半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸,而胰岛素 A、B 链中不含甲硫氨酸
【解析】解：（1）根据题意和图示分析可知：图1基因表达载体中已有目的基因、启动子和标记基因，所以没有标注出来的基本结构是终止子．（2）图1中启动子是RNA聚合酶酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达即转录过程；氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来．（3）构建基因表达载体的过程中，必须用相同的限制酶切割（含目的基因的外源DNA分子）和运载体，以产生相同的黏性末端，再加入DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．（4）β﹣半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，这样可以防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解．（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，由于β﹣半乳糖苷酶中含有多个甲硫氨酸，而胰岛素的A、B链中不含甲硫氨酸，所以用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β﹣半乳糖苷酸被切成多个肽段．

所以答案是：（1）终止子；（2）RNA聚合；作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来；（3）限制酶和DNA连接酶；（4）防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解；（5）β﹣半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素 A、B 链中不含甲硫氨酸

【考点精析】关于本题考查的基因工程的原理及技术，需要了解基因工程的原理是利用DNA重组技术才能得出正确答案．