题目内容
【题目】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、Bau3 A I、Bst I、HaeⅢ、Not I所指位点为限制酶的酶切位点，五种酶的识别序列及切割位点在下表中。据图表回答
（1）若需在短时间内获得较多的外源基因，通常采用 技术。
（2）将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条单链分开，叫做DNA 。处理后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复为双链DNA，叫做 。大量的如右图中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中会形成
种DNA。
（3）若对图中质粒进行改造，插入的Not I酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。
（4）要将人乳蛋白基因插入载体，如果只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因，应选择的限制酶是 。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。
（6）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。
（7）将外源基因导入受精卵常用的方法是 。将目的基因导入植物细胞常用的方法是 。
（8）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 技术。
【答案】（1）PCR（2）变性 退火 1
（3）高 （4）Bau3A I （5）DNA连接
（6）氨苄青霉素 （7）显微注射法 农杆菌转化法（8）抗原——抗体杂交
【解析】（1）短时间获得大量的外源基因，采用PCR技术
（2）将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条单链分开，叫做DNA变性，处理后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复为双链DNA，叫做退火。根据碱基互补配对原则，图2中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中只能形成1种DNA
（3）碱基之间的配对遵循碱基互补配对原则，即C-G，A-T，且C和G之间有3个氢键，A和T之间有2个氢键，因此C和G的含量越高，DNA分子热稳定性也越高．Not I酶切位点中均为C-G碱基对，因此插入的Not I酶切位点越多，质粒中的C和G的含量就越高，其热稳定性也越高
（4）根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Bau3AI还可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将人乳蛋白基因插入载体，在只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因的情况下，应选择限制酶Bau3AI
（5）质粒与目的基因结合利用DNA连接酶
（6）用限制酶Bau3AI切割后会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此倒入重组质粒的受体细胞可能在含有氨苄青霉素的培养基上生存下来
（7）将外源基因导入受精卵常用的方法是显微注射法，导入植物细胞的方法是农杆菌转化法
（8）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原——抗体杂交技术。
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