题目内容
基因工程利用某目的基因（图甲）和Pl噬菌体载体（图乙）构建重组DNA。限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ、EcoR I和Sau3A I。下列分析错误的是
- A.构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
- B.构建重组DNA时，可用EcoR I和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
- C.图乙中的P1噬菌体载体只用EcoR I切割后，含有2个游离的磷酸基团
- D.用EcoR I切割目的基因和P1噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA
试题分析：P1噬菌体载体是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团，从图2可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团；C正确。从图甲看出，用EcoR I切割目的基因后两端各有一切口，与图乙中EcoR I切口对接时，可有两种可能，即可产生两种重组DNA；D错误。
考点：本题考查基因工程的相关知识，是学生提升获取图示信息、审题、分析能力的较好选择。
肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
(1)进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为 。
(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 (RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。
(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为 。
(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：
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限制酶 |
片段及长度 |
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Hind Ⅲ |
2.5 kb，5.0 kb |
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Sma I |
2.0 kb，5.5 kb |
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Hind Ⅲ和Sma I |
2.5 kb，3.0 kb，2.0 kb |
可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有 个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为 的片段。
（每空2分，共11分）请分析回答基因工程的相关问题：
（1）（3分）基因工程的理论基础是 法则，可用公式（图解）表示为
。?
（2）（4分）利用PCR技术（全称： ）可以扩增目的基因，即在试管中进行DNA的人工复制获得大量DNA克隆分子。某样品DNA中共含有3000个碱基对，碱基数量满足：（A+T）：（G+C）=1 ：2，现计划通过PCR得到100个与样品相同的DNA，至少需要向试管中加入 个腺嘌呤脱氧核苷酸。
（3）（4分）为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。
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已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对） |
第一步水解 |
产物 （单位bp） |
第二步水解 |
产物 （单位bp） |
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A酶切割 |
1900 |
将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割 |
1700 200 |
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1500 |
800 700 |
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1600 |
1100 500 |
由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为 个和 个。