Question

【题目】某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用的固体培养基因含有碳酸钙而呈不透明状，而乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。请回答下列问题：

（1）实验室用于培养细菌的培养基含有水、碳源、______，若培养乳酸菌，则还需要向培养基中添加_______。培养基配制和菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是_______。

（2）分离纯化乳酸菌时，首先要对泡菜滤液进行梯度稀释，需要进行梯度稀释的原因是________。在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用可能是中和乳酸和__________。分离纯化时应挑选出_________的菌落作为候选菌。

（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_____________________。

Answer 1

【答案】氮源和无机盐 维生素 先调节pH，后灭菌 泡菜滤液中乳酸菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 鉴别乳酸菌 透明圈较大 保证涂布后可分离出单一菌落

【解析】

培养基的成分主要包括水、无机盐、碳源氮源，培养微生物时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。微生物常见的接种的方法：①平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长 ，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）实验室用于培养细菌的培养基一般含有氮源、碳源、水和无机盐，若培养乳酸菌，则还需要向培养基中添加维生素。培养基配制和菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是先要调节pH值，再灭菌，如果先灭菌再调节pH可能造成培养基的污染。

（2）分离纯化乳酸菌时，首先要对泡菜滤液进行梯度稀释，需要进行梯度稀释的原因是在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利乳酸菌的鉴别；分离纯化时应挑选出在平板上有溶钙圈（透明圈）大的菌落作为候选菌。

（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是过多造成表面细菌较多，不一定能够得到单一菌株形成的菌落。