Question

【题目】酶切图谱是描述限制性内切酶的酶切点的位置和距离信息的图谱，通常选取某一特定长度的DNA分子，用多种限制酶单独或联合切割，再通过电泳技术将酶切片段进行分离，计算相对大小，从而确定每一种限制酶在DNA分子中的切点位置和相对距离。下图表示BamHⅠ、BstⅠ、BglⅡ三种限制酶识别的核苷酸序列和切割位点，表格中数据是用限制酶EcoR Ⅴ、Mbo Ⅰ单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度。请回答下列问题：

BamH Ⅰ ―→＋ Bst Ⅰ ―→＋

Bgl Ⅱ ―→＋

酶	DNA片段长度
EcoRⅤ	14 kb
MboⅠ	2.5 kb、11.5 kb
EcoRⅤ＋MboⅠ	2.5 kb、5.5 kb、6 kb

(1)限制性内切酶BamHⅠ与BstⅠ作用的特点是________________，BamHⅠ与BglⅡ作用的特点是________________。黏性末端＋重组的DNA分子________(填“能”或“不能”)被BglⅡ识别。

(2)请在图中画出质粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。

(3)DNA连接酶与DNA聚合酶作用的共同点是都形成________键，不同点是____________________________。

(4)在基因工程中，检测受体细胞是否含有目的基因采用的方法是________________。

Answer 1

【答案】（1）识别相同的核苷酸序列，而且切点相同 识别的核苷酸序列不同，产生相同的黏性末端 不能

(2)见下图

（3）磷酸二酯 DNA连接酶连接DNA片段之间的磷酸二酯键，DNA聚合酶连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键

(4)DNA分子杂交技术

【解析】

试题分析：（1）限制酶BamHⅠ与BstⅠ能识别相同的核苷酸序列，而且切点相同；BamHI与BglⅡ识别的核苷酸序列不同，但能产生相同的黏性末端作。黏性末端重组的DNA序列为GGATCC∥CCTAGG，而限制酶BglⅡ的识别序列为AGATCT∥TCTAGA，根据酶的专一性原理可知，重组DNA分子不能被BglⅡ识别。

（2）用限制酶EcoRV单独切割时，只能形成一种长度为14kb的DNA片段，说明该质粒上只有一个EcoRV酶切位点；用限制酶MboⅠ单独切割时，能形成两种长度分别为2.5 kb、11.5 kb的DNA片段，说明该质粒上有2个MboⅠ酶切位点；用限制酶EcoRV、MboⅠ同时切割时，能形成三种长度分别为2.5 kb、5.5 kb、6 kb的DNA片段，说明11.5kb的DNA片段被切割成两段，即11.5kb的DNA该片段上有一个EcoRV酶切位点，因此质粒上EcoRV、MboⅠ的切割位点图如答案所示。

（3）DNA连接酶与DNA聚合酶作用的共同点都形成是磷酸二酯键，不同点是DNA连接酶连接DNA片段之间的磷酸二酯键，DNA聚合酶连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。

（4）检测受体细胞是否含有目的基因常用DNA分子杂交技术。