Question

【题目】嗜热土壤芽胞杆菌产生的P-葡萄糖苷酶（BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其大量生产，科学家打算利用转基因技术使大肠杆菌表达BglB酶，开展了以下试验：

注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同

(1) 根据所学细胞学有关知识，利用大肠杆菌 (能、不能）生产人的糖蛋白，你作出判断的理由是 。

(2) 大肠杆菌经常作为基因工程的受体细胞，其优点是 。

(3) PCR扩增时，可以从 的基因组文库中获取bglB基因作为模板。

(4) 如图为所选质粒的酶切图谱，bglB基因两端不含图中限制酶的识别序列，为使bglB基因能重组进该质粒并构建表达载体，扩增的bglB基因两端应当加上 酶或 酶的识别序列。

(5) 若某种限制酶切割形成的DNA片段如下，则可以选择 进行连接，连接后可形成的DNA片段为 (写出两种）。

…AC GC… …GC GT…

…TG CG… …CG CA…

Answer 1

【答案】（1)不能（1分） 原核细胞没有内质网、高尔基体，不能对糖蛋白进行加工 (2) 繁殖快、遗传物质少、单细胞 (3) 嗜热土壤芽胞杆菌 (4) NdeI BamHI (5) T4DNA连接酶 （写出两种，合理即可）

…ACGC… 或 …ACGT… 或…GCGC… 或 …GCGT…

…TGCG… …TGCA… …CGCG… …CGCA…

【解析】（1）大肠杆菌是原核生物，细胞内没有内质网和高尔基体等细胞器，所以利用大肠杆菌不能产生糖蛋白这样的分泌蛋白。（2）基因工程中常常选用大肠杆菌作为的受体细胞，其优点是单细胞生物，繁殖快、遗传物质少。（3）根据题意可知，嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB），因此PCR扩增bglB基因时，选用嗜热土壤芽孢杆菌基因组DNA作模板。（4）根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应导入启动子和终止子之间．图中看出，两者之间存在三种限制酶切点，但是由于Xbal在质粒上不止一个酶切位点，因此为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列。（5）能将平末端的DNA片段连接起来的连接酶只有T4DNA连接酶。结合图示，连接后可形成的DNA片段为…ACGC… 或 …ACGT… 或…GCGC… 或 …GCGT…

…TGCG… …TGCA… …CGCG… …CGCA…