题目内容
【题目】如下图为农杆菌Ti质粒的T-DNA区段结构示意图。农杆菌附着植物细胞后，T-DNA首先在农杆菌中从右边界到左边界被剪切、复制，然后进入植物细胞并整合到染色体上，继而诱发细胞异常生长和分裂，形成植物肿瘤。以下有关叙述不正确的是（ ）
A.Ti质粒存在于农杆菌的拟核DNA之外
B.植物肿瘤的形成与A、B两个基因的表达有关
C.清除植物肿瘤组织中的农杆菌后肿瘤不再生长
D.利用T-DNA进行转基因时需保留LB、RB序列
【答案】C
【解析】
农杆菌Ti质粒的基因被剪切后整合到植物的染色体上，因为其质粒上存在细胞分裂素和生长素基因，相应基因表达可诱发细胞异常生长和分裂，形成植物肿瘤。
A、质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体（或拟核）以外的DNA分子，存在于细胞质中，具有自主复制能力的环状的双链DNA分子，Ti质粒存在于农杆菌的拟核DNA之外，A正确；
B、因为质粒整合到植物染色体上以后能诱发细胞异常生长和分裂，形成植物肿瘤，所以可推测植物肿瘤的形成与质粒上的细胞分裂素和生长素基因过量表达有关，B正确；
C、清除植物肿瘤组织中的农杆菌后，还有整合到植物DNA上的Ti质粒，通过基因的复制表达也会导致肿瘤继续生长，C错误；
D、农杆菌的T-DNA能整合到染色体上的前提是Ti质粒上的LB、RB序列被剪切，才能连接整合到植物细胞DNA上，D正确。
故选C。
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【题目】玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性状，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤Ⅰ、Ⅱ试验。
Ⅰ、获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如图。
（1）为防止酶切产物____________________，构建基因表达载体需用2种限制酶。
（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系__________的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。
激素 结果 自交系 | 2，4-D（2.0mg/L） | 6-BA（0.5mg/L） | IBA（2.0mg/L） |
愈伤组织形成率（%） | 芽的分化率（%） | 根的诱导率（%） | |
甲 | 99 | 13 | 90 |
乙 | 85 | 80 | 87 |
丙 | 88 | 83 | 12 |
丁 | 16 | 85 | 83 |
（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含____________________的选择培养基。
（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是____________________和_________________________。
（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占__________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系A。
Ⅱ．通过回交使自交系B获得抗除草剂性状
（6）抗除草剂自交系A（GG）与自交系B杂交产生F1，然后进行多轮回交（下图）。自交系B作为亲本多次回交的目的是使后代积累越来越多______________________。
（7）假设子代生活力一致，上图育种过程H3代中含G基因植株的比例是__________，若回交后每代不进行鉴定筛选，直接回交，H3代中含G基因植株的比例是__________。
（8）下表是鉴定含G基因植株的4种方法。请预测同一后代群体中，4种方法检出的含基因植株的比例最小的是__________。
方法 | 检测对象 | 检测目标 | 检出的含G基因植株的比例 |
PCR扩增 | 基因组DNA | G基因 | x1 |
分子杂交 | 总mRNA | G基因转录产物 | x2 |
抗原-抗体杂交 | 总蛋白质 | G基因编码的蛋白质 | x3 |
喷洒除草剂 | 幼苗 | 抗除草剂幼苗 | x4 |
（9）利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①第__________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
②在PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为____________________________。
（10）对Hn继续筛选，最终选育出高产、抗病、抗除草剂等优良性状的玉米自交系。
