回答下列关于基因工程的相关问题.质粒是基因工程中的一种常用的工具之一.经修饰改造后的质粒如下图七一1所示.PUC118上的Lacz基因编码β半乳糖苷酶的一条多肽链.其表达产物与菌落颜色有关,经“修饰后的“多克隆位点位于LacZ基因之中.AmpR是抗氮卞青霉素基因.1．PUC118上的基因AmpR作用的是: “多克隆位点中含有多种限制酶的识别序� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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回答下列关于基因工程的相关问题。

质粒是基因工程中的一种常用的工具之一，经修饰改造后的质粒如下图七一1所示。PUC118上的Lacz基因编码β半乳糖苷酶的一条多肽链，其表达产物与菌落颜色有关；经“修饰”后的“多克隆位点”位于LacZ基因之中。Amp^R是抗氮卞青霉素基因。

1．PUC118上的基因Amp^R作用的是：________“多克隆位点”中含有多种限制酶的识别序列，如HindⅢ，其切割后产生的DNA片断中含有的部分序列是，则限制酶HindⅢ的识别序列是________。

2．图2示意将目的基因导入大肠杆菌的操作步骤。其中，I～V表示操作过程；A－F表示使用的相关工其，其中的E1和E2表示有关的酶。试问：E2应是________（酶）；经过E2的切割，供体染色体中的DNA片段中游离的磷酸基团总数的变化是：________。

在策略上，图1中的“多克隆位点”包含了多种、多个识别序列，请说出设计这种“多克隆位点”的目的：________。

3．LacZ基因可以使细菌在含有X－gttl（5－溴－4－氯－3－吲哚－B－D－半乳糖）底物和IPTG（一种乳糖类似物）的培养基上形成蓝色的菌落，即X－gal被lacZ基因编码产生的鼻半乳糖昔酶水解成蓝色；若要形成重组质粒，则在含X－gal的培养基上将形成白色菌落（而不是蓝色的）。

请据图2分析下列问题：

①用本无PUC118的大肠杆菌作为受体细胞，将培养瓶C中被连接处理后的DNA混合物倾入含X－gal、IPTG和________的D培养基平板上，其目的是________。

菌落生长结果图2中所示。

②过程V进行转移培养，则该应该挑选X、Y、Z中的________菌落进行液体培养。形成该颜色的生理原因是________。如此目的基因便被克隆了！

答案：

作为标记基因，供筛选用（亦可为-TTCGAA-或-AAGCTT）
限制酶增加了四个游离的磷酸基团可根据目的基因的需要，选用不同的限制酶进行切割，再对外源DNA进行切割，产生相互匹配的粘性末端，方便了进一步连接。
①氨卞青霉素形成大量拷贝，并选择
②Z 插入了目的基因的重组质粒，LacZ基因被外源DNA隔断而失活携带重组质粒的大肠杆菌不能利用X－gal，因此形成白色菌落。

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回答下列关于基因工程的问题

下图1是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图2、图3中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）若对图2中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性如何变化，为什么？

（2）图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止。

（3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。

（4）图1过程①可采用的操作方法是，过程②可采用的生物技术是。过程③可采用的生物技术是。

（5）分别从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是_______________。

回答下列关于基因工程的问题：

如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：

(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的，使质粒与目的基因结合成重组质粒。

(2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：

将得到的细菌涂抹在一个含有的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件；。

(3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有

的培养基上培养，若细菌，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用作为探针。

（4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴的途径。

(5) 目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于

。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么? 。

回答下列关于基因工程的问题：
如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：

(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的            ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。
(2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：
将得到的细菌涂抹在一个含有               的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件                     ；                                           。
(3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有
               的培养基上培养，若细菌               ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用                                   作为探针。
（4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴                       的途径。
(5)目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于
      。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么?                   。

回答下列关于基因工程的问题。

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：

（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。

（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。

（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图1所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图1和2所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。

（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_____________。

下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。