Question

【题目】 为了增加菊花花色类型，研究者获取其他植物的花色基因C，将其与质粒重组为基因表达载体，再借助农杆菌导入菊花中。回答下列问题。

（1）获取花色素基因C的方法有_____（答出一条即可）。将花色素基因C与质粒构建为基因表达载体时需要用到的工具酶有_____。

（2）基因表达载体中必须含有标记基因。标记基因的作用是_____。

（3）除农杆菌转化法外，还可以采用_____等方法将基因表达载体导入菊花中。

（4）目的基因导入受体细胞后，可以采用DNA分子杂交技术检测C基因是否整合到菊花的DNA上。请简要描述检测的操作过程：_____。

（5）检测基因C是否翻译成蛋白质，是从转基因菊花中提取出蛋白质，进行_____杂交，若有杂交带出现，表明基因C已形成蛋白质产品。

Answer 1

【答案】从基因文库中获取目的基因或利用PCR技术扩增目的基因 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而筛选出含有目的基因的细胞 基因枪法或者花粉管通道法 提取出转基因菊花的基因组，将花色素基因C用同位素等标记作为探针，使探针与基因组杂交 抗原﹣抗体

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）获取目的基因的方法有：从基因文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因；构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割目的基因和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA。

（2）标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而筛选出含有目的基因的细胞。

（3）将目的基因导入植物细胞可采用农杆菌转化法、基因枪法或者花粉管通道法。

（4）检测目的基因是否导入受体细胞，可采用DNA分子杂交技术，过程为：提取出转基因生物的基因组，将目的基因用同位素等标记作为探针，使探针与基因组杂交。

（5）检测目的基因是否翻译成蛋白质，可采用抗原-抗体杂交法，即从转基因菊花中提取出蛋白质，进行抗原-抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产品。