题目内容
【题目】近年来烟草叶绿体基因工程在提高光合效率、抗性和品质等方面取得了研究进展。下图是将拟南芥果糖1，6-二磷酸醛缩酶基因（简称“醛缩酶基因”）转入烟草叶绿体基因组的部分流程示意图，请据图回答下列问题：
（I）图1中，利用PCR技术扩增拟南芥醛缩酶基因时，应选用的引物是____________。图2重组质粒中未标注出的必需元件还有___________，构建该重组质粒用的限制性核酸内切酶有__________。
（2）将拟南芥醛缩酶基因导入烟草叶绿体基因组时，一般将含有目的基因的质粒包裹在金粉上，通过轰击进入叶绿体中，这种方法称为_____________。叶绿体基因组中存在基因区和基因间隔区，应将目的基因导入叶绿体基因组中的基因间隔区，其原因是_______________________________。
（3）检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是_____________，该项技术用到的基因探针的制作方法是：在________________________________上用放射性同位素等做标记。
（4）若拟南芥醛缩酶基因在烟草叶绿体中成功表达，其活性是野生型烟草的1.4~1.9倍，在高
浓度下可达2.2倍，说明拟南芥醛缩酶通过_________________来提高光合效率。
【答案】引物甲、引物丙 复制原点 
和
基因枪法 避免对叶绿体自身的基因组的表达造成影响 DNA分子杂交技术 含有目的基因的DNA单链片段 促进暗反应中CO2的固定（利用）
【解析】
基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取的方法有：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有：农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是：显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是：感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）图1中，基因中两条链是反向平行的，故利用PCR技术扩增目的基因时，选引物时应该选方向相反且把目的基因包含在里面，故所选的引物是引物甲、引物丙。重组质粒应包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点等，图2重组质粒中未标注出的必需元件还有复制原点，由图2可知，BamHI会破坏标记基因，结合图1目的基因两端的限制酶切点可判断构建该重组质粒用的限制性核酸内切酶应选择Hind III和Bcl I。
（2）将目的基因导入烟草叶绿体基因组时，一般将含有目的基因的质粒包裹在金粉上，通过轰击进入叶绿体中，这种方法称为基因枪法。叶绿体基因组中存在基因区和基因间隔区，为避免对叶绿体自身的基因组的表达造成影响，应将目的基因导入叶绿体基因组中的基因间隔区。
（3）检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是DNA分子杂交技术，该项技术用放射性同位素等做标记含有目的基因的DNA单链片段作基因探针。
（4）若拟南芥醛缩酶基因在烟草叶绿体中成功表达，其活性是野生型烟草的1.4~1.9倍，在高
浓度下可达2.2倍，说明拟南芥醛缩酶通过促进暗反应中CO2的固定（利用）来提高光合效率。
