题目内容
某同学在做微生物实验时,不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起,请你设计实验分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。?
(1)实验原理: 。?
(2)材料用具:配制培养基所需要的各种原料、无菌操作箱、接种环等。?
(3)简述主要步骤:?
①制备两种培养基,一种是 培养基;另一种是 培养基。分别分成两份,依次标上A、a、B、b备用。?
②分别向A、B培养基中接种混合菌。?
③接种后,放在恒温箱中培养3~4 d。?
④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌,分别接种到a、b培养基中。?
⑤接种后,把a、b培养基再放入恒温箱中培养3~4 d。?
(4)实验结果:在a、b培养基上获得的分别是 、 。?
(5)回答问题:?
步骤④、⑤的目的是 。?
(1)圆褐固氮菌是自生固氮菌,能在无氮培养基上生长繁殖,而酵母菌则不能;青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖,而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖?
(3)无氮 加青霉素?
(4)圆褐固氮菌 酵母菌(顺序根据学生答题的具体情况)?
(5)获得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌?
解析:
解答本题的关键是根据不同微生物的特点选择恰当的培养基。将微生物进行分离一般采用选择培养基。选择培养基是在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。圆褐固氮菌是自生固氮菌,能在无氮培养基上生长繁殖,而酵母菌则不能;青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖,而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。根据这一原理可将两种微生物分离开来。为获得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌,可以用选择培养基重复进行选择培养。
(10分)圆褐固氮菌是自生固氮菌,为经济有效地提高农作物产量,人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行,PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代,从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。
(1)某同学在做微生物实验时,不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起,已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖,但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤:
①分别配置 的培养基和 的培养基,分别分成两份,依次标上A、a、B、b备用;
②分别向A、B培养基接种 ;
③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d;
④从A、B培养基上生长的 中挑取生长良好的菌株,分别接种到 中;
⑤ 。
(2)用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因,然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
| 反应条件 | ||
| | 温度 | 时间 |
| 变 性 | 95℃ | 30s |
| 复 性 | 55℃ | 30s |
| 延 伸 | 72℃ | 1min |
| 30个循环后 | 适宜 | 5-10min |
| 保 温 | 4℃ | 2h |
| PCR反应体系 | 50ul |
| 缓冲液 | 5ul |
| 脱氧核苷酸 | 1ul |
| 引物A | 0.5ul |
| 引物B | 0.5ul |
| DNA聚合酶 | 0.5U |
| 模板DNA | 1-2ul |
| 加去离子水补足至50 ul | |
此外,从反应条件看,所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
(9分)请回答下列有关微生物的问题。
(1)在微生物分离、鉴定实验中,通常在配置固体培养基时需在培养基中加入 ___(物质)。
(2)采用固体平板培养细菌时,为防止冷凝水影响细菌的生长,需将培养皿 ____培养。
(3)下表为探究抗生素对微生物抑制作用的实验处理。先将大肠杆菌接种于培养基上,然后将培养皿置于37℃条件下培养2~3天,观察、测量并记录 _______________情况。如果实验所用抗生素的浓度关系为A< C < B,则编号1、2、3、4的抑菌效果从大到小依次为 __________________________________。
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编号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
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圆纸片浸在 |
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浓度A抗生素 |
浓度B抗生素 |
浓度C抗生素 |
蒸馏水 |
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(4)现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5,它们不能合成生长所必需的物质G,已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物,但不知这些物质合成的顺序, 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。
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根据以上结果,推测这几种物质的合成顺序应是 。
(5)某同学在做微生物实验时,不小心把自生固氮菌和酵母菌混在一起,请你帮助该同学完善实验步骤,将自生固氮菌和酵母菌分离开来:
①制备两种培养基,对两种培养基的处理方式分别是:一种是 ,另一种是 ,将两种培养基各自分成两份,依次标上A,a和B,b。
②分别向A、B培养基中接种 菌,适宜条件下培养3-4天。
③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a和b培养基中,适宜条件下培养3-4天。其目的是 。