题目内容
【题目】Ⅰ.图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示质粒，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示目的基因及限制酶切点。请回答下列问题：
（1）图1中限制酶EcoRⅠ的特点是_____。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是_____。
A．解旋酶作用于①处，DNA连接酶作用于②处
B．③和④相间排列，构成了DNA分子的基本骨架
C．③代表磷酸，④代表脱氧核苷酸
D．用该片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有43种
（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是_____。
（4）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含_____基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
Ⅱ.酶工程包括酶的生产、酶的分离纯化、酶的固定化和酶的应用。
（5）生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的_____。
A．过滤酶 B．干燥酶 C．层析酶 D．沉淀酶
（6）因固化条件不同，会造成固化酶的活力（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量）受到使用次数的影响，由图5信息，你对该固化酶的使用，给予指导性的意见是_____。
【答案】特异性地识别GAAATTC和切割DNA中鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间的键（特异性识别和切割DNA分子） ABD PstⅠ、EcoRⅠ 抗四环素 D 固定化酯酶的活力随使用次数的增多而下降，一般重复使用3次后，酶活力下降更快，建议更换
【解析】
1、基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
2、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
（1）由题目可知，EcoRⅠ识别的GAAATTC序列中的G和A，故切开的是鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间相连的化学键。
（2） A、解旋酶作用中①氢键处，DNA连接酶都可作用于②磷酸二酯键处，A正确；
B、磷酸和脱氧核糖交替连接构成DNA分子的基本骨架，B正确；
C、③代表磷酸，④代表脱氧核糖，C错误；
D．用该片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有43种，D正确。
故选：ABD。
（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，则应保留标记基因，切割目的基因和质粒时可选择2中酶，以免导致无效连接；据图3可知，切割目的基因是最好选择EcoRⅠ、HindⅠ，或者PstⅠ、EcoRⅠ，则切割质粒时应选择产生相同黏性末端的酶，且应保证至少保留1种标记基因，故可选择的限制酶是 PstⅠ、EcoRⅠ，此时四环素抗性基因被保留。
（4）保留的标记基因是四环素抗性基因，如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含抗四环素基因基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。
（5）生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的沉淀酶。
（6）根据题意，因固化条件不同，会造成固化酶的活力（注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量）受到使用次数的影响；由图5信息可知，固定化酯酶的活力随使用次数的增多而下降，一般重复使用3次后，酶活力下降更快，建议更换。
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