Question

【题目】华蟾素是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据图中信息回答下列问题。

Ⅰ.肝癌细胞的培养

（1）培养肝癌细胞时，在培养基中加入适量的___________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入___________。此外，每48h更换1次培养液，目的是___________；同时还要提供适宜的温度、___________、氧气和二氧化碳等环境条件。

Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：

（2）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链式反应技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如表。

华蟾素浓度（μg/ml）	0	0.105	0.21	0.42
TopoⅡ基因表达量	+++++	++++	++	+

①逆转录-聚合酶链反应的主要原理是：提取肝癌细胞中的总RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，为完成该反应还需要添加______________________________________。

②由上可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是_______________________________。

Answer 1

【答案】 血清（血浆） 抗生素 防止代谢物积累对细胞自身造成危害 pH 逆转录 引物、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）和四种脱氧核苷酸 抑制TopoⅡ基因的转录，最终导致TopoⅡ含量降低

【解析】试题分析：分析表中结果可知，随着华蟾素注射液浓度的增加，TopoⅡ基因表达量减少，再结合题干信息“DNA拓扑异构酶Ⅱ在DNA复制、转录等方面发挥重要作用，且它在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞”分析，华蟾素注射液可能的作用机理是抑制TopoⅡ基因转录，导致TopoⅡ含量降低。

（1）在动物细胞培养时，所需的营养物质有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，将这些物质按其类别和所需的数量严格配制而成的培养基，成为合成培养基。由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在使用合成培养基时，通常需要加入血清、血浆等一些天然成分；为防止培养过程发生污染需要在培养基加入抗生素；为了防止代谢物积累对细胞自身造成危害，还要定时更换培养液；同时还要提供适宜的温度、PH、氧气和二氧化碳等环境条件。

（2）①逆转录需要以提取的mRNA为模板，以游离的脱氧核苷酸为原料，在逆转录酶的催化下合成cDNA片段。进行PCR扩增技术需要准备四类物质条件：模板（cDNA）、原料（四种脱氧核苷酸），引物和Taq酶。②由表中实验结果可知，华蟾素注射液在分子水平上影响肝癌细胞的机理是抑制TopoⅡ基因的转录，最终导致TopoⅡ含量降低。