Question

【题目】经研究发现，将PVY﹣CP基因导入马铃薯，使之表达即可获得抗PVY病毒马铃薯，而PVY﹣CP基因位于某种环状DNA分子中．如图1表示获得抗病毒马铃薯的操作过程，其中①﹣⑧表示步骤，NPTⅡ基因是卡那霉素抗性基因，图中农杆菌不含此基因．表是图中限制酶识别序列和切割位点．

（1）步骤②中Klenow酶能将DNA片段的粘性末端变成平末端，且DNA长度不变，据此推测，其功能与下列酶的功能相同的是_____

A．限制性核酸内切酶 B．解旋酶 C．DNA连接酶 D．DNA聚合酶

（2）由步骤②所获取的片段中，图1中BamHⅠ的酶切位点位于_____．

（3）由步骤③获取的目的基因有_____个粘性末端；步骤④中选用的限制酶是_____；经步骤⑤所形成的结构是_____．

（4）为了筛选农杆菌，可以在培养基中加入_____进行筛选．利用农杆菌转化法获得含目的基因的马铃薯细胞，进而通过_____技术获得抗PVY病毒马铃薯苗，最后进行相关的鉴定．

Answer 1

【答案】D C 1 BglⅡ或SmaⅠ 重组质粒 卡那霉素 植物组织培养

【解析】

分析题图：图示是获得抗病毒马铃薯的部分操作，步骤①～③是从质粒A中获取目的基因（PVY-CP）的过程；质粒B是选用的运载体；④过程需要用限制酶处理质粒B；⑤表示基因表达载体的构建过程，该过程需要DNA连接酶。

（1）步骤②中Klenow酶能将DNA片段的粘性末端变成平末端，且DNA长度不变，说明Klenow酶能催化DNA链的合成，从而将DNA片段的粘性末端变成平末端。

A、限制性核酸内切酶的作用是切割DNA片段，形成黏性末端，A错误；

B、解旋酶的作用是将DNA双螺旋解成单链，B错误；

C、DNA连接酶的作用是连接DNA片段的黏性末端，C错误；

D、DNA聚合酶的作用是催化DNA链的合成，D正确。

故选：D。

（2）由于经HindⅢ酶切割后，该DNA为链状DNA，则末端D点为HindⅢ切割点，故图1中BamHⅠ的酶切位点位于 C。

（3）据图示可知，由步骤③获取的目的基因一端平齐，一端为粘性末端，故共有1个粘性末端；由于目的基因只有一个粘性末端，故需选择一种粘性末端相同的限制性内切酶，另一种选择平末端限制酶，故步骤④中选用的限制酶是BglⅡ或SmaⅠ；经步骤⑤所形成的结构是重组质粒。

（4）为了筛选农杆菌，可以在培养基中加入卡那霉素进行筛选，卡那霉素抗性基因常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．利用农杆菌转化法获得含目的基因的马铃薯细胞，进而通过植物组织培养技术获得抗PVY病毒马铃薯苗，最后进行相关的鉴定。