题目内容
【题目】下图是利用基因工程技术生产可食用疫苗的部分过程,其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。下列有关说法正确的是
A. 构建基因表达载体需要用到EcoRⅠ、PstⅠ两种限制酶
B. 若用图中四种限制酶同时切割质粒，可以产生四个DNA片段
C. 表达载体中除图示标注的结构外还应有启动子和终止子等调控因子
D. 筛选含重组质粒的受体细胞时应在培养基中加入卡那霉素抗性基因
【答案】ABC
【解析】
质粒上和含抗原基因的DNA中含有的限制酶的酶切位点相同。SmaⅠ的识别位点位于抗原基因中，PstⅠ、EcoRⅠ的识别位点分别位于抗原基因的两端；选择PstⅠ、EcoRⅠ切割含抗原基因的DNA不会破坏抗原基因的结构。质粒上的卡那霉素抗性基因为标记基因，可供重组DNA的鉴定和选择。
题图显示：抗原基因中存在SmaⅠ的识别位点，使用SmaⅠ切割含抗原基因的DNA会破坏抗原基因的结构，抗原基因的两端分别含有PstⅠ、EcoRⅠ的识别位点，用PstⅠ、EcoRⅠ切割含抗原基因的DNA，能保持抗原基因结构的完整性，所以构建基因表达载体需要用到EcoRⅠ、PstⅠ两种限制酶，A正确；质粒是一种很小的双链环状DNA分子，若用图中四种限制酶同时切割质粒，可以产生四个DNA片段，B正确；表达载体中除图示标注的结构（目的基因、标记基因）外还应有启动子和终止子等调控因子，C正确；筛选含重组质粒的受体细胞时应在培养基中加入卡那霉素，D错误。
【题目】产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是__________（填编号）。
编号 | ① | ② | ③ | ④ |
物品 | 培养基 | 接种环 | 培养皿 | 涂布器 |
灭菌方法 | 高压蒸汽 | 火焰灼烧 | 干热 | 臭氧 |
（2）称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经__________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌__________个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行__________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以__________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径__________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株__________进行后续相关研究，理由是__________。
